中大量质粒富集提取试剂盒

基本信息‌

‌中文名称‌：中大量质粒富集提取试剂盒

货号：P-PR1492

规格：40T、60T

‌英文名称‌：Medium-to-large Scale Plasmid Enrichment Extraction Kit
作用机制：优化碱裂解法与沉淀体系，从大体积菌液中高效释放质粒DNA；利用PEG沉淀法初步富集质粒，再结合离子交换层析或磁珠纯化技术，去除宿主DNA、RNA、内毒素等杂质；最终获得高浓度、高纯度的质粒DNA，适配基因治疗、蛋白表达等大规模实验。 

适用样本：大肠杆菌培养的中大规模质粒菌液（≥100ml）
产品概述

本试剂盒采用改进的碱裂解法结合独特的杂质清除技术，可从大量细菌培养液中高效富集和纯化质粒DNA。提取过程无需使用酚、氯仿等有毒试剂，获得的质粒DNA纯度高、超螺旋比例高、内毒素含量低，能直接用于细胞转染、基因编辑、测序等高精度下游实验。  

产品组成  

组分名称 规格（20次装） 功能说明

溶液P1 150mL 悬浮菌体，抑制核酸酶活性

溶液P2 120mL 裂解菌体，释放质粒DNA

溶液PⅢ 130mL 中和裂解液，沉淀蛋白质

杂质清除剂 50mL 特异性结合并去除内毒素和杂质

结合液 200mL 调节体系，促进质粒结合硅胶柱

洗涤液Ⅰ 300mL 去除大部分蛋白质和RNA杂质

洗涤液Ⅱ 300mL 去除盐离子和残留小分子杂质

洗脱液 100mL 从硅胶柱上解离纯化的质粒DNA

RNase A 2mL 降解体系中的RNA杂质

硅胶纯化柱 20个 特异性吸附质粒DNA

50mL收集管 20个 收集纯化过程中的流出液

产品特点  

高效富集：从200-250mL大肠杆菌培养液中可富集800-1500μg高拷贝质粒DNA  

低内毒素：内毒素含量低于0.05EU/μg DNA，满足敏感细胞系转染和动物实验需求  

高完整性：对大型质粒（10kb以上）的提取效果优异，DNA断裂少，完整性好  

操作简便：无需酚氯仿抽提和乙醇沉淀，整个提取过程约1.5小时  

操作步骤  

菌体收集：取200-250mL对数生长期的菌液，5000g离心10分钟，弃尽上清  

菌体悬浮：加入10mL溶液P1，彻底悬浮菌体沉淀，确保无结块  

菌体裂解：缓慢加入10mL溶液P2，温和颠倒离心管4-6次，室温静置5分钟，至溶液变清亮  

中和沉淀：缓慢加入10mL溶液PⅢ，温和颠倒离心管6-8次，室温静置10分钟，此时出现白色絮状沉淀  

杂质清除：加入5mL杂质清除剂，充分混匀，室温静置10分钟，12000g离心10分钟，将上清液小心转移至新离心管  

质粒结合：加入0.7倍体积的结合液，充分混匀，将混合液分批加入硅胶纯化柱，8000g离心2分钟，弃流出液  

洗涤纯化：加入10mL洗涤液Ⅰ，8000g离心2分钟，弃流出液；加入10mL洗涤液Ⅱ，8000g离心2分钟，弃流出液，重复洗涤一次  

干燥柱体：将纯化柱置于新的50mL收集管中，12000g离心5分钟，彻底去除残留的洗涤液  

质粒洗脱：向纯化柱中加入5-10mL预热至65℃的洗脱液，室温静置5分钟，12000g离心5分钟，收集管中即为纯化的质粒DNA  

注意事项  

提取低拷贝质粒时，需加倍使用菌液量，并按比例增加所有试剂的用量  

处理大型质粒时，操作动作要轻柔，使用大口径吸头，避免机械剪切导致DNA断裂  

杂质清除剂需在使用前充分摇匀，确保清除效果  

纯化后的质粒DNA可在-20℃保存1年，避免反复冻融

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