小量高纯去内毒素质粒提取试剂盒

基本信息‌

‌中文名称‌：小量高纯去内毒素质粒提取试剂盒

货号：P-PR1490

规格：50T、100T

‌英文名称‌：Small-scale High-purity Endotoxin-free Plasmid Extraction Kit
作用机制：通过碱裂解法裂解细菌细胞，释放质粒DNA；结合内毒素特异性吸附剂，在裂解与纯化过程中去除脂多糖类内毒素；利用硅胶膜离心柱选择性结合质粒DNA，经含去垢剂的洗涤液去除蛋白质、基因组DNA及残留内毒素，最终洗脱得到无内毒素质粒，适配细胞转染、动物注射等场景。 

适用样本：大肠杆菌培养的质粒菌液
产品概述

本试剂盒基于碱裂解法原理，结合特制的内毒素去除试剂与离心吸附柱技术，可从1~5mL大肠杆菌培养物中快速提取高纯度、低内毒素的质粒DNA。提取的质粒内毒素含量极低，可直接用于细胞转染、病毒载体生产、基因治疗等对质粒质量要求严苛的实验，也适用于酶切、PCR、测序等常规分子生物学操作。

产品组成（以50次反应规格为例）

组分 规格 保存条件

溶液P1（含RNaseA） 10mL 2~8℃保存

溶液P2 10mL 室温保存

溶液P3 10mL 室温保存

内毒素清除剂 5mL 室温保存

漂洗液 30mL 室温保存（使用前需加无水乙醇）

洗脱缓冲液 6mL 室温保存

吸附柱与收集管 50套 室温保存

产品特点

高效去内毒素：采用特制内毒素清除剂，通过多步处理可最大程度去除质粒中的内毒素，内毒素含量≤0.01EU/μg DNA，远低于行业标准，避免内毒素对细胞转染等实验的干扰。

高纯度与高得率：提取的质粒DNA A260/A280纯度比在1.8-2.0之间，超螺旋结构占比≥90%，高拷贝质粒得率可达5-15μg，低拷贝质粒也能保证稳定提取量。

操作简便快速：无需使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，全程操作可在1小时内完成，简化实验流程的同时保障实验人员安全。

结果稳定可靠：吸附柱采用特制硅基质膜，柱间吸附量差异小，重复性好，有效避免质粒降解，实验结果稳定。

操作步骤

收集菌体：取1-5mL过夜培养的菌液，12000rpm离心1min，吸除上清（菌液浓度低时可多次离心收集）。

重悬菌体：向离心管中加入200μL溶液P1（确认已加入RNaseA），用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌沉淀，确保菌块完全散开。

裂解菌体：加入200μL溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不超过5min。

中和裂解液：加入200μL溶液P3，立即温和地上下翻转6-8次充分混匀，出现白色絮状沉淀后，12000rpm离心10min，小心转移上清至新离心管，避免吸出沉淀。

去除内毒素：加入上清1/5体积的预冷内毒素清除剂，振荡混匀后冰浴2min至溶液变清亮；37℃水浴5min，不时振荡使溶液变浑浊，12000rpm离心5min，转移上层水相至新管，重复此步骤3次。

吸附质粒：加入600μL漂洗液（已加无水乙醇），充分混匀后加入吸附柱，室温放置2min，12000rpm离心1min，倒掉收集管废液，将吸附柱放回收集管。

洗涤吸附柱：向吸附柱中加入600μL漂洗液，12000rpm离心1min，弃废液，重复此步骤1次；随后12000rpm离心2min，彻底去除吸附柱中残余的漂洗液。

洗脱质粒：将吸附柱放入干净离心管，向吸附膜中央悬空滴加50-200μL经65℃预热的洗脱缓冲液，室温放置2min，12000rpm离心1min；可将洗脱液重新加入吸附柱重复离心，提高质粒回收量。

注意事项

试剂预处理：使用前需检查溶液P2、P3是否出现浑浊，如有浑浊可在37℃水浴中加热至澄清；漂洗液需按说明加入无水乙醇充分混匀。

操作规范：裂解和中和步骤需温和操作，避免剧烈振荡导致基因组DNA污染；内毒素去除过程中需严格按照冰浴、水浴的时间和温度要求操作，确保去内毒素效果。

洗脱效率：洗脱缓冲液体积不应少于50μL，建议使用65℃预热的洗脱液以提高洗脱效率；若使用水洗脱，需保证pH值在8.0左右，pH值过低会降低洗脱效率。

储存与安全：试剂盒组分中，RNaseA需2-8℃保存，其余组分室温保存即可，有效期18个月；实验操作时需穿实验服、佩戴手套和口罩，产品仅供科研使用，请勿用于医药、临床诊断等领域。

结果检测：提取的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度，OD260值为1相当于约50μg/mL DNA。

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