Hi T7高产RNA合成试剂盒

基本信息‌

‌英文名称‌：Hi T7 High-Yield RNA Synthesis Kit
作用机制：利用T7 RNA聚合酶，以线性化的DNA模板为模板，在体外高效合成RNA；试剂盒含优化的反应缓冲液、NTPs与T7 RNA聚合酶，可实现RNA的高产合成，合成的RNA可用于基因功能研究、疫苗研发等。 

适用样本：克隆有T7启动子的线性化DNA模板，适用于体外合成mRNA、siRNA、lncRNA等。
产品概述
Hi T7高产RNA合成试剂盒是一款基于T7 RNA聚合酶的体外转录试剂盒，用于高效合成大量的RNA分子。T7 RNA聚合酶能够特异性识别T7启动子序列，并以DNA为模板合成互补的RNA链。该试剂盒包含高活性的T7 RNA聚合酶、反应缓冲液、NTP混合物、RNA酶抑制剂等组分，优化的反应体系与条件可实现RNA的高产合成，通常每微克模板DNA可合成数十至数百微克的RNA。合成的RNA可用于多种分子生物学实验，如RNA结构与功能研究、RNA干扰（RNAi）实验、体外翻译、RNA疫苗研发等。试剂盒操作简便，反应条件温和，转录效率高，合成的RNA纯度高、完整性好，为体外RNA合成提供了高效可靠的解决方案。
产品特点
超高转录效率：每μg模板DNA可合成≥500μg RNA，比常规T7转录试剂盒产量高2-3倍。

长链RNA合成：可合成长达10kb的完整RNA分子，适用于长链非编码RNA研究。

RNA完整性好：优化的反应体系，合成的RNA完整性高，无降解片段，适合结构与功能研究。

操作简便：单一反应体系，37℃孵育2-4小时即可完成转录，无需复杂纯化步骤。
核心PCR试剂及使用方法

1. Taq DNA聚合酶

作用：催化DNA链的延伸，是PCR反应的核心酶

使用方法：

通常按0.5-2U/25μL体系添加，具体用量参照试剂说明书

酶对温度敏感，需在冰上操作，避免反复冻融

最后加入酶液，防止提前激活导致非特异性扩增

2. dNTP混合液

作用：提供DNA合成的原料（dATP、dTTP、dCTP、dGTP）

使用方法：

终浓度一般为200μmol/L每种dNTP，总浓度800μmol/L

避免反复冻融，可分装成小体积储存

注意pH值，过酸或过碱会抑制聚合酶活性

3. PCR缓冲液

作用：提供酶促反应的适宜环境（pH、离子浓度）

使用方法：

通常为10×浓度，使用时稀释至1×终浓度

含Mg²+的缓冲液需注意Mg²+浓度，一般1.5-2.5mmol/L为最优范围

部分缓冲液含KCl、Tris-HCl等成分，无需额外添加

4. 引物（上游/下游）

作用：定位扩增区域，引导DNA合成起始

使用方法：

终浓度一般为0.1-1μmol/L，根据引物Tm值调整

引物需用TE缓冲液或无菌水溶解，浓度计算准确

避免引物降解，-20℃分装储存，避免反复冻融

5. 模板DNA

作用：提供扩增的原始DNA模板

使用方法：

模板浓度一般为1ng-1μg/25μL体系，根据模板类型调整

基因组DNA需充分纯化，避免蛋白、RNA等杂质污染

质粒DNA可适当减少用量，一般10-100ng即可

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实验流程

反应体系配制：按1×工作浓度混合预混液、模板（10-100 ng）、引物（0.2-0.5 μM）及无核酸酶水。

PCR程序：

预变性：95℃ 30 sec

扩增循环（40×）：95℃ 5 sec → 60℃ 30 sec（荧光采集）

熔解曲线分析：60-95℃梯度升温。

注意事项

避免反复冻融，推荐分装保存。

熔解曲线需呈现单一峰以确保扩增特异性。

若需绝对定量，建议配套标准品使用。