Golden 1st cDNA Synthesis Kit（with dsDNase） 新品

基本信息‌

‌英文名称‌：Golden 1st cDNA Synthesis Kit (with dsDNase)
作用机制：在逆转录反应前，利用dsDNase特异性降解样本中的基因组DNA，避免基因组DNA污染导致的假阳性结果；随后使用高活性逆转录酶合成第一链cDNA，保证cDNA的纯度与完整性。 

适用样本：细胞、组织、血液等来源的总RNA样本，尤其适用于基因表达分析、qPCR等对基因组DNA污染敏感的实验。
产品概述
Golden 1st cDNA Synthesis Kit（with dsDNase）是一款带有双链DNA酶（dsDNase）的第一链cDNA合成试剂盒，专为去除样本中的基因组DNA污染、高效合成cDNA设计。试剂盒包含高性能反转录酶、dsDNase、反应缓冲液、dNTPs、引物等组分，其中dsDNase可特异性降解样本中的双链基因组DNA，而不影响RNA模板，有效避免了基因组DNA对后续实验（如qPCR）的干扰。反转录酶具有高活性与高特异性，能高效催化RNA反转录为cDNA，适用于多种RNA模板（如总RNA、mRNA等），可合成长片段cDNA。该试剂盒操作流程简便，先利用dsDNase去除基因组DNA污染，再进行反转录反应，合成的cDNA纯度高、特异性好，可直接用于PCR、qPCR、基因表达分析、基因克隆等实验，为基因表达研究提供了可靠的技术支持。
产品特点
基因组DNA去除：内置dsDNase，特异性降解基因组DNA，不影响RNA模板，有效避免gDNA污染。

高保真性反转录：采用高保真反转录酶，碱基错配率低，适合基因表达定量分析。

广谱模板适配：可反转录总RNA、mRNA、病毒RNA、microRNA等多种RNA模板。

操作简便：先去除gDNA，再进行反转录，单一反应体系完成，无需额外步骤。
实验前准备

试剂与耗材检查：确认PCR预混液、上下游引物、模板DNA、无酶水等试剂在有效期内，外观无浑浊、沉淀；PCR管、枪头需为无酶无菌规格。

仪器预热：提前10-15分钟启动PCR仪，设置好反应程序，确保仪器达到预设温度。

环境准备：在超净工作台内操作，佩戴无粉手套，避免交叉污染；操作前用75%酒精擦拭台面和移液器。

反应体系配制

冰上操作：将所有试剂放置于冰盒内，避免酶失活。

体系配比（以25μL体系为例）：

PCR预混液（含Taq酶、dNTP、Buffer）：12.5μL

上游引物（10μM）：1μL

下游引物（10μM）：1μL

模板DNA：1-5μL（根据模板浓度调整）

无酶水：补足至25μL

轻柔混匀：用移液器轻轻吹吸混合液3-5次，避免产生气泡；若有气泡可短暂离心去除。

分装体系：将配制好的反应液分装至PCR管中，每管25μL，盖紧管盖。

PCR仪上机反应

程序设置：根据引物Tm值和实验需求设置三步法或两步法程序：

预变性：95℃，3-5分钟

循环阶段：95℃变性30秒，55-65℃退火30秒，72℃延伸（根据片段长度调整，1kb约1分钟），循环25-35次

终延伸：72℃，5-10分钟

保温：4℃。

上机运行：将PCR管放入PCR仪样品槽，确保管盖紧密贴合；启动程序，等待反应完成。

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注意事项

无菌操作：所有试剂和耗材需高压灭菌或无菌处理，避免外源DNA污染

温度控制：酶、dNTP等试剂需-20℃储存，避免反复冻融

体系优化：根据引物Tm值、模板类型调整Mg²+浓度和退火温度

对照设置：每次实验需设置阴性对照（无模板）和阳性对照（已知阳性模板）