甲酰胺嘧啶-DNA糖基化酶(Fpg)

基本信息‌

‌英文名称‌：Formamidopyrimidine-DNA Glycosylase (Fpg)
作用机制：一种DNA糖基化酶，可特异性识别并切除DNA链中的甲酰胺嘧啶、8-氧代鸟嘌呤等氧化损伤碱基，产生AP位点，同时具有AP裂解酶活性，可切割AP位点处的DNA链，参与DNA氧化损伤修复过程。 

适用样本：含有氧化损伤碱基（如甲酰胺嘧啶、8-氧代鸟嘌呤）的DNA样本，可用于DNA氧化损伤修复机制研究、氧化应激检测等实验。
产品概述
这是一种DNA修复酶，能够特异性识别并切除DNA中的甲酰胺嘧啶、8-羟基鸟嘌呤等氧化损伤碱基，形成AP位点，参与DNA的碱基切除修复过程。它在研究DNA氧化损伤与修复机制、筛选抗氧化药物、检测环境因素对DNA的损伤等实验中发挥重要作用，为揭示氧化应激相关疾病的发病机制提供工具支持。
产品特点
氧化损伤修复：特异性识别并切除DNA中的8-羟基鸟嘌呤、甲酰胺嘧啶等氧化损伤碱基

多功能酶活性：兼具DNA糖基化酶和AP内切酶活性，可完成损伤碱基切除和链断裂

抗氧化研究工具：用于检测氧化应激对DNA的损伤，筛选抗氧化药物

原核生物来源：源自大肠杆菌，适用于原核和真核生物DNA损伤研究
操作步骤

一、实验前准备

向漂洗液1中加入60mL无水乙醇，向漂洗液2中加入45mL无水乙醇，充分混匀后标记

载体RNA溶液配制：向300μg载体RNA冻干粉中加入300μL无酶水，充分溶解后得到1μg/μL的工作液，分装后-20℃保存

将冷冻样本置于室温解冻，轻轻颠倒混匀后备用

二、手工提取流程

样本裂解：取200μL血液样本至1.5mL离心管中，加入20μL蛋白裂解酶、300μL裂解缓冲液，振荡混匀10秒，室温孵育10分钟（每3分钟颠倒混匀1次）

磁珠结合：加入15μL磁珠悬浮液（使用前充分振荡混匀），振荡混匀10秒，室温孵育10分钟（每3分钟颠倒混匀1次）

磁珠分离：将离心管置于磁力架上，静置1-2分钟至磁珠完全吸附，小心吸弃上清液（避免触碰磁珠）

洗涤纯化：

取下离心管，加入500μL漂洗液1，振荡混匀1分钟，再次置于磁力架上分离磁珠，吸弃上清

重复上述操作1次

加入500μL漂洗液2，振荡混匀1分钟，置于磁力架上分离磁珠，吸弃上清

重复上述操作1次

干燥磁珠：保持离心管在磁力架上，室温晾干5-10分钟（确保乙醇完全挥发，避免过度干燥）

核酸洗脱：加入100-200μL洗脱缓冲液，振荡混匀后56℃孵育5分钟，置于磁力架上分离磁珠，上清液即为提取的核酸

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注意事项

实验操作需在洁净环境中进行，佩戴手套、口罩，避免样本交叉污染

蛋白酶K需-20℃保存，使用时避免反复冻融，可分装后使用

还原剂需现用现加，避免长时间暴露于空气中失效

若毛囊样本角质化严重，可适当延长孵育时间或增加还原剂用量

提取的DNA可置于-20℃长期保存，短期可在4℃储存

若需提高DNA产量，可将洗脱液重复洗脱一次吸附柱