核酸外切酶I(E.coli)

基本信息‌

‌英文名称‌：Exonuclease I (E.coli)
作用机制：一种大肠杆菌来源的3'-5'核酸外切酶，可特异性降解单链DNA，对双链DNA、RNA或RNA-DNA杂合链无作用，常用于去除PCR反应中残留的单链引物。 

适用样本：PCR反应产物，可用于去除残留的单链引物，以便进行后续的DNA测序、克隆等实验。
产品概述
这是一种从大肠杆菌中分离得到的核酸外切酶，具有3'→5'外切酶活性，能够特异性降解单链DNA，释放单核苷酸，而对双链DNA、RNA和DNA-RNA杂合链几乎无活性。它主要用于去除DNA样品中的单链DNA杂质，如PCR反应中的引物残留、单链DNA模板等，可提升DNA样品的纯度，为后续的分子克隆、测序等实验提供高质量的模板。
产品特点
3'→5'外切活性：从单链DNA的3'末端持续降解，释放单核苷酸

双链特异性：对双链DNA几乎无活性，特异性作用于单链核酸

引物去除专家：高效清除PCR和测序反应中的单链引物残留

反应可控：通过调节酶量和反应时间，可控制降解产物长度
操作步骤

样本处理：向1.5ml EP管中加入600μl miRNA提取试剂，再加入500μl血清或血浆样本，漩涡振荡30秒充分混匀

初步分离：13000rpm离心5分钟，将上清约1ml转移至新的2ml EP管中，加入1ml异丙醇，上下颠倒混合均匀

柱式吸附：将混合液分三次加入吸附柱（每次约700μl），13000rpm离心15秒，倒掉过柱液

洗涤纯化：

向吸附柱中加入700μl 75%异丙醇，13000rpm离心15秒，倒掉过滤液

向吸附柱中加入500μl无水乙醇，13000rpm离心15秒，倒掉过滤液

干燥柱体：吸附柱13000rpm空离心2分钟，去除残留乙醇，室温放置2分钟使乙醇完全挥发

RNA洗脱：在吸附柱滤芯中央加入30μl RNase-Free TE缓冲液，室温静置2分钟，13000rpm离心2分钟，收集滤液即为提取的miRNA产物

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注意事项

样本处理：

血浆抗凝剂建议使用EDTA或柠檬酸钠，避免使用肝素（会抑制PCR检测）

样本应避免反复冻融，新鲜样本建议尽快处理

试剂使用：

miRNA提取试剂含有胍盐，具有强烈腐蚀性，操作时需佩戴防护眼镜、手套和口罩

自备试剂需确保无RNase污染，避免影响RNA完整性

实验操作：

所有操作需在无RNase环境中进行，使用RNase-Free的枪头和离心管

离心过程需确保离心管盖紧，避免液体渗漏

产物检测：

由于血清/血浆中miRNA含量极低，提取产物浓度通常在5ng/μl以下，难以用常规NanoDrop测量，建议直接取10μl进行下游反转录实验

为获得更可靠数据，推荐使用特异性和灵敏度更好的TaqMan探针法进行miRNA定量检测

产物保存：提取的miRNA产物可立即用于下游实验，或分装后置于-80℃长期保存，避免反复冻融