Tth Endonuclease IV

基本信息‌

‌英文名称‌：Tth Endonuclease IV
作用机制：一种热稳定型DNA内切酶，可特异性切割DNA链上的AP位点，同时具有3'磷酸酶活性，可去除DNA链3'末端的磷酸基团，在高温下仍能保持活性，适用于高温环境下的DNA损伤修复研究。 

适用样本：含有AP位点的DNA样本，可用于高温环境下的DNA损伤修复机制研究、DNA修饰分析等实验。
产品概述
该酶是一种从嗜热菌Thermus thermophilus中克隆表达的核酸内切酶，具有AP位点内切酶活性和3'→5'外切酶活性，能够修复DNA损伤中的AP位点和3'端损伤。它在DNA碱基切除修复通路中发挥作用，可用于研究高温环境下的DNA损伤与修复机制，也可用于体外修复损伤的DNA分子，为极端环境下的分子生物学研究提供工具支持。
产品特点
AP位点修复：特异性切割DNA上的无嘌呤/无嘧啶（AP）位点

3'端损伤修复：可修复DNA 3'端的氧化损伤和断裂位点

高温活性：最适反应温度65℃，适合高温环境下的DNA修复研究

功能多样性：参与DNA碱基切除修复通路，是研究极端环境DNA修复的工具酶
操作步骤

.配制反应体系：（以25μl体系为例）

组分 体积

10×反应缓冲液 2.5μl

MgCl₂（25mM） 1.5-2.5μl（根据模板调整）

dNTPs（10mM each） 0.5μl

上游引物（10μM） 1μl

下游引物（10μM） 1μl

模板DNA 1-5μl

3173 DNA Polymerase 0.2-0.5μl

ddH₂O 补至25μl

.PCR扩增：设置循环参数 95℃预变性3min；95℃变性30s，50-65℃退火30s，72℃延伸（1min/kb），25-35个循环；72℃终延伸10min

.产物处理：扩增产物需添加Loading Buffer后进行1%琼脂糖凝胶电泳

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注意事项

试剂预处理：使用前需按照瓶身标签提示，向漂洗液中加入指定体积的无水乙醇

沉淀处理：若裂解液、结合缓冲液出现沉淀，可在37℃水浴中加热溶解，摇匀后再使用

操作环境：实验需在洁净环境中进行，避免样本交叉污染；所有离心步骤均在室温下完成

试剂保存：试剂盒未开封时，可在15~25℃干燥环境下保存12个月；开封后蛋白酶K需置于-20℃保存，避免反复冻融

安全防护：若试剂接触皮肤或黏膜，需立即用大量自来水冲洗