Thermostable RnaseH

基本信息‌

‌英文名称‌：Thermostable RNaseH
作用机制：一种热稳定型核糖核酸酶H，可特异性水解RNA-DNA杂合链中的RNA链，在高温下仍能保持较高活性，可在PCR反应过程中有效去除RNA模板，避免其对后续反应的干扰。 

适用样本：RNA-DNA杂合链样本，适用于RT-PCR反应、cDNA合成、核酸结构分析等实验，尤其适合在高温PCR体系中使用。
产品概述
这是一种热稳定的核糖核酸酶H，能够在较高温度下特异性切割RNA-DNA杂合链中的RNA部分，产生带有3'-羟基和5'-磷酸末端的片段。其热稳定特性使其适用于高温反应体系，如PCR相关实验中RNA模板的去除、高温条件下的cDNA合成后处理等，能在保持高温反应效率的同时，有效清除RNA-DNA杂合链，确保后续实验的准确性。
产品特点
高温耐受性：最适反应温度55-65℃，95℃处理仍可保持部分活性

热稳定优势：适合高温反转录和PCR体系，无需额外降温步骤

特异性保留：仅切割RNA-DNA杂合链，不影响单链/双链核酸完整性

应用场景：高温cDNA合成后RNA模板清除、RT-PCR产物纯化
实验前准备

试剂与耗材检查：确认PCR预混液、上下游引物、模板DNA、无酶水等试剂在有效期内，外观无浑浊、沉淀；PCR管、枪头需为无酶无菌规格。

仪器预热：提前10-15分钟启动PCR仪，设置好反应程序，确保仪器达到预设温度。

环境准备：在超净工作台内操作，佩戴无粉手套，避免交叉污染；操作前用75%酒精擦拭台面和移液器。

反应体系配制

冰上操作：将所有试剂放置于冰盒内，避免酶失活。

体系配比（以25μL体系为例）：

PCR预混液（含Taq酶、dNTP、Buffer）：12.5μL

上游引物（10μM）：1μL

下游引物（10μM）：1μL

模板DNA：1-5μL（根据模板浓度调整）

无酶水：补足至25μL

轻柔混匀：用移液器轻轻吹吸混合液3-5次，避免产生气泡；若有气泡可短暂离心去除。

分装体系：将配制好的反应液分装至PCR管中，每管25μL，盖紧管盖。

PCR仪上机反应

程序设置：根据引物Tm值和实验需求设置三步法或两步法程序：

预变性：95℃，3-5分钟

循环阶段：95℃变性30秒，55-65℃退火30秒，72℃延伸（根据片段长度调整，1kb约1分钟），循环25-35次

终延伸：72℃，5-10分钟

保温：4℃。

上机运行：将PCR管放入PCR仪样品槽，确保管盖紧密贴合；启动程序，等待反应完成。

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注意事项

无菌操作：所有试剂和耗材需高压灭菌或无菌处理，避免外源DNA污染

温度控制：酶、dNTP等试剂需-20℃储存，避免反复冻融

体系优化：根据引物Tm值、模板类型调整Mg²+浓度和退火温度

对照设置：每次实验需设置阴性对照（无模板）和阳性对照（已知阳性模板）