T7 Endonuclease I

基本信息‌

‌英文名称‌：T7 Endonuclease I
作用机制：一种DNA内切酶，可特异性切割错配的DNA双链、十字形结构DNA、Holliday junction结构DNA以及部分双链DNA的单链区域，常用于检测DNA同源重组、基因突变等。 

适用样本：含有错配碱基、十字形结构或Holliday junction结构的DNA样本，适用于基因编辑效率检测、基因突变分析、同源重组研究等实验。
产品概述
这是一种从T7噬菌体感染的大肠杆菌中分离得到的核酸内切酶，能够识别并切割错配的DNA碱基对、十字形结构DNA、Holliday连接体以及部分双链DNA的损伤位点。它在DNA突变检测、同源重组分析、DNA损伤研究等实验中发挥重要作用，可用于检测PCR产物中的突变位点、筛选基因突变体，为基因功能研究和疾病相关基因突变分析提供有力支持。
产品特点
错配识别切割：特异性识别并切割DNA错配碱基对、十字形结构和Holliday连接体

突变检测工具：可检测PCR产物中的单碱基突变、小片段插入缺失

同源重组分析：用于鉴定DNA同源重组事件，研究基因重组机制

反应条件温和：最适温度37℃，55℃处理10分钟可终止反应
操作步骤

一、实验前准备

向漂洗液1中加入60mL无水乙醇，向漂洗液2中加入45mL无水乙醇，充分混匀后标记

载体RNA溶液配制：向300μg载体RNA冻干粉中加入300μL无酶水，充分溶解后得到1μg/μL的工作液，分装后-20℃保存

将冷冻样本置于室温解冻，轻轻颠倒混匀后备用

二、手工提取流程

样本裂解：取200μL血液样本至1.5mL离心管中，加入20μL蛋白裂解酶、300μL裂解缓冲液，振荡混匀10秒，室温孵育10分钟（每3分钟颠倒混匀1次）

磁珠结合：加入15μL磁珠悬浮液（使用前充分振荡混匀），振荡混匀10秒，室温孵育10分钟（每3分钟颠倒混匀1次）

磁珠分离：将离心管置于磁力架上，静置1-2分钟至磁珠完全吸附，小心吸弃上清液（避免触碰磁珠）

洗涤纯化：

取下离心管，加入500μL漂洗液1，振荡混匀1分钟，再次置于磁力架上分离磁珠，吸弃上清

重复上述操作1次

加入500μL漂洗液2，振荡混匀1分钟，置于磁力架上分离磁珠，吸弃上清

重复上述操作1次

干燥磁珠：保持离心管在磁力架上，室温晾干5-10分钟（确保乙醇完全挥发，避免过度干燥）

核酸洗脱：加入100-200μL洗脱缓冲液，振荡混匀后56℃孵育5分钟，置于磁力架上分离磁珠，上清液即为提取的核酸

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注意事项

实验操作需在洁净环境中进行，佩戴手套、口罩，避免样本交叉污染

蛋白酶K需-20℃保存，使用时避免反复冻融，可分装后使用

还原剂需现用现加，避免长时间暴露于空气中失效

若毛囊样本角质化严重，可适当延长孵育时间或增加还原剂用量

提取的DNA可置于-20℃长期保存，短期可在4℃储存

若需提高DNA产量，可将洗脱液重复洗脱一次吸附柱