半纤维素（hemicellulose）含量试剂盒说明书
分光光度法50管/48样
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
半纤维素是植物细胞壁中与纤维素紧密结合的多糖混合物，是构成细胞初生壁的主要成分，广泛存在
于植物中，是一种新型可利用能源。
测定原理：
半纤维素经酸处理后转化成还原糖，与DNS生成红棕色物质，在540nm有特征吸收峰，吸光值大反
映了半纤维素含量。
组成：
产品名称GMS066-50T/48SStorage
试剂一：液体60mL4℃
试剂二：液体60mL4℃
试剂三：液体30mL4℃
试剂四：液体10mL4℃，避光
标准品：D-木糖10mg×1管4℃，避光
说明书一份
标准品（选做）：可将标准品用提取液稀释至10mg/ml母液，用于标准曲线制作。
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版本2.0，最后更新于2026年3月25日
自备仪器和用品：
天平、40目筛，离心机，恒温水浴锅、烘箱、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿（1cm）、乙醇、
丙酮。
样品处理
1、样品80℃烘干至恒重，粉碎，过40目筛。称取0.01g样本，加入80%乙醇1mL，90℃水浴30min，
冷却至室温，8000g、25℃离心10min，弃上清留沉淀，80℃烘干。
2、在上述烘干的沉淀中加入1mL试剂一，充分混匀后，95℃水浴60min，取出冷却后，8000g、25℃
离心10min，弃上清留沉淀，用蒸馏水清洗3次（加入1mL蒸馏水混匀即可），8000g、2℃离心10
min，弃上清留沉淀，再用丙酮清洗1次（加入1mL丙酮混匀即可），8000g、25℃离心10min，弃
上清留沉淀，80℃烘干。
3、在上述烘干的沉淀中加入1mL试剂二，95℃水浴30min，取出冷却后，8000g、25℃离心10min。
取上清500μL，加入500μL试剂三，混匀后待用。
样品制备注意事项：
1、80℃烘干的时间为2小时，依据样本情况可延长烘干时间。
2、90℃或95℃加热过程中EP管可能爆开，建议用胶带封口或使用带螺旋盖的防爆EP管。
测定操作表：
试剂（μL）空白管测定管
上清（μL）240
蒸馏水（μL）240
试剂四（μL）180180
蒸馏水（μL）780780
充分混匀，90℃水浴5min，自然冷却，25℃、8000g离心10min
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版本2.0，最后更新于2026年3月25日取1mL上清液于1mL玻璃比色皿，测定
△540nm处吸光值A。分别记为A空
白管和A测定管，A=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。
计算公式：
标准条件下测定的回归方程为y=0.509x-0.06883，R2=0.9979；x为标准品浓度（mg/mL），y为吸
光值。半纤维素含量（mg/g干重）=[（
△A+0.06883）÷0.509]×V样总÷W=3.929×（
△A+0.06883）÷W
W：样品质量，g；V样总：加入提取液体积，2mL。
注意事项：
1.若ΔA大于0.8，需对样本处理后的上清液进行稀释，最终计算结果需乘以稀释倍数。
2.若ΔA值小于0.01，可增加样本质量W。
3.本法测定的线性范围为0.25~5mg/mL，ΔA检测下限为0.01；检测上限为0.8。
4.提供的标准曲线及公式仅供参考，若有需要，可用提供的标准品自制标曲（计算公式及线性范围
根据自制标准曲线需作对应修改），但需要注意，受仪器及个人操作影响，客户自制标准曲线可
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能与说明书中提供的标准曲线有差别。若无另外的实验要求，也可直接使用说明书所给标曲进行
计算。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
实验实例：
样本为木聚糖（玉米芯来源，85%），样本处理后的上清液稀释20倍，重复三次实验。按测定步骤操作，
测得结果如下表，根据计算公式得：
样本-1样本-2样本-3
△g）0.10090.10830.0603
W（
A1.0531.0450.508
半纤维素含量
873.67808.17751.70
（mg/g干重）
示例：样本-1半纤维素含量（mg/g干重）=3.929×（1.053+0.06883）÷0.1009×20=873.67
常见问题及解决方案：
问题可能原因解决方法
样品类型不合适参考说明书了解不兼容的样品类型
组织样品匀浆不充分延长超声时间/增加匀浆器的研磨次数
样品读样品反复冻融次数过多将样品分装，不可反复冻融
数重复样品中含有干扰物质排查干扰物质，必要时对样品进行脱蛋白处理
性差样品读数超出线性范围对样品进行浓缩或稀释，使读数处于线性范围内
气泡会干扰读数，操作时尽量避免产生气泡，读数前务
孔中有气泡
必去除气泡
样品放置时间过长或储存不当使用新鲜制备的样品，按推荐温度保存至使用前
样品和
试剂盒组分未完全解冻待组分完全解冻后轻轻混匀再使用
标准品
试剂在冰上放置时间过长每次使用前新鲜配制反应混合液
读数偏
孵育时间/温度不当参考说明书推荐的孵育时间和/或温度
低/偏高
试剂加样量错误检查移液枪是否校准（始终使用能吸取整体积的最小量
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程移液枪）；尽量避免吸取过小体积的试剂
配制反应混合液时移液误差始终配制混合母液
参考文献：
[1]RAFIQULISM,SAKINAHAMM,ZULARISAMAW.HydrolysisofLignocellulosicBiomassfor
RecoveringHemicellulose:StateoftheArt[M/OL]//WasteBiomassManagement–AHolisticApproach.
SpringerInternationalPublishing,2017:73-106.http://dx.doi.org/10.1007/978-3-319-49595-8_4.
DOI:10.1007/978-3-319-49595-8_4.
[2]DESHAVATHNN,MUKHERJEEG,GOUDVV,etal.Pitfallsinthe3,5-dinitrosalicylicacid(DNS)assay
forthereducingsugars:Interferenceoffurfuraland5-hydroxymethylfurfural[J].InternationalJournalof
BiologicalMacromolecules,2020,156:180-185.
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