人原代听神经瘤细胞永生化细胞专用培养基 新品

人原代听神经瘤细胞永生化细胞专用培养基

商品属性：

产品介绍：

人原代听神经瘤细胞永生化细胞专用培养基由团队精心优化，经过长期测试，本产品可保持人原代听神经瘤细胞永生化细胞最佳的生长状态。

本产品中已包含人原代听神经瘤细胞永生化细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于人原代听神经瘤细胞永生化细胞 的培养。

肿瘤细胞培养体系     500 ml

产品主要成分

原代肿瘤细胞基础培养基         440 ml

原代肿瘤细胞培养添加剂     5 ml

特级胎牛血清      50 ml

P/S青霉素-链霉素    5 ml

运输和保存

运输：放置于含有生物冰袋的保温箱中低温运输

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2个月；-20℃，避光，保存6个月。
质量控制

实验原理：

以DMEM/F12培养基为基础，添加10%优质胎牛血清、1%双抗及神经生长因子（NGF），模拟人原代听神经瘤永生化细胞的生理环境。培养基中的营养成分和生长因子可支持细胞增殖并维持其听神经细胞特性，用于听神经瘤的发病机制研究及药物筛选。
使用方法：

1. 培养基配制（若为干粉或基础培养基）

将500ml基础培养基溶解于适量超纯水中，搅拌均匀。

依次加入5ml生长添加剂、10ml特级胎牛血清和5ml双抗，轻轻摇匀。

用无菌滤膜（0.22μm孔径）对混合后的培养基进行过滤除菌，转移至无菌容器中备用。

2. 细胞培养操作

（1）复苏细胞

将含有1ml细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中，轻轻摇晃加速解冻。

解冻后，将细胞悬液转移至无菌离心管中，加入4ml完全培养基混合均匀。

1000rpm离心3min，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬细胞。

将细胞悬液接种至T25培养瓶或6cm培养皿中，补充适量完全培养基，置于37℃、5%CO₂培养箱中培养过夜，第二天换液并检查细胞密度。

（2）传代培养

当细胞密度达到80%-90%时，进行传代操作。首先弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

加入1ml消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3min，显微镜下观察细胞大部分变圆并脱落时，迅速拿回操作台。

轻敲培养瓶，加入2-3ml完全培养基终止消化，轻轻吹打制成单细胞悬液。

将细胞悬液转移至无菌离心管，1000rpm离心5min，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬细胞。

按1:2的比例将细胞悬液接种至新的培养瓶或培养皿中，补充完全培养基至8ml，置于培养箱中继续培养。

（3）细胞冻存

待细胞生长状态良好时，收集细胞悬液，1000rpm离心4min，弃去上清液，用PBS清洗一遍。

加入无血清冻存液，调整细胞密度至5×10⁶～1×10⁷/mL，轻轻混匀。

将细胞悬液分装至冻存管中，每管1ml，做好标记。

将冻存管放入-80℃冰箱预冻24h后，转入液氮罐中长期储存。
注意事项：

无菌操作 全程超净台操作，避免交叉污染；培养基出现浑浊、沉淀立即弃用。

温度控制 使用前必须 37℃预热，禁止直接冷培养基培养，避免细胞脱落、凋亡。

消化控制 产品对胰酶敏感，严格控制消化时间（1~3min），过度消化导致细胞损伤。

血清依赖 禁止使用＜10% FBS 培养，劣质血清会导致 AR/PSA 表达丢失、生长停滞。

雄激素实验 若开展雄激素相关实验，需更换为无酚红 RPMI-1640+10% 活性炭处理血清（CD-FBS），避免酚红弱雌激素干扰。

仅限科研 本产品仅用于科研实验，不可用于临床诊断、治疗。
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