HCMEC/D3永生化人脑微血管内皮细胞专用培养基 新品

HCMEC/D3永生化人脑微血管内皮细胞专用培养基

商品属性：

产品介绍：

HCMEC/D3 细胞专用培养基由团队精心优化，经过长期测试，本产品可保持HCMEC/D3细胞最佳的生长状态。

本产品中已HCMEC/D3包含HCMEC/D3 细胞生长所需的各种成分，无需添加任何成分，可直接用于HCMEC/D3细胞的培养。

产品主要成分

内皮细胞专用培养基     465 ml

内皮细胞培养添加剂           5ml

优质胎牛血清        25ml

P/S 双抗          5ml

运输和保存

运输：放置于含有生物冰袋的保温箱中低温运输

保存方法：2℃～8℃，避光，保存1个月；-20℃，避光，保存3个月。
质量控制

实验原理：

以EGM-2培养基为基础，添加10%优质胎牛血清和1%抗生素，模拟永生化人脑微血管内皮细胞的生长环境，为HCMEC/D3细胞提供充足的营养物质和能量，支持细胞的贴壁生长和增殖，维持细胞的脑微血管内皮细胞特性，如血脑屏障功能，用于脑血管疾病的研究和药物筛选。
培养基配置步骤：

1. 配置前准备

试剂与耗材：MEM培养基粉末（或液体）、优质胎牛血清、青霉素-链霉素混合液、5-溴-2'-脱氧尿苷（可选）、无菌超纯水、0.22μm无菌滤膜、无菌血清瓶、移液枪、无菌移液管等

无菌环境：超净工作台提前开启紫外灯照射30分钟消毒，实验人员佩戴无菌手套、口罩，操作前用75%酒精擦拭双手和工作台

2. 基础培养基配置（以粉末MEM为例）

按照MEM培养基说明书的比例，将适量培养基粉末加入到装有900ml无菌超纯水的无菌烧杯中

用磁力搅拌器充分搅拌，直至培养基粉末完全溶解

加入适量碳酸氢钠粉末（根据说明书调整），调节培养基pH值至7.2-7.4

将溶液通过0.22μm无菌滤膜过滤除菌，转移至无菌血清瓶中，标注“MEM基础培养基”及配置日期

3. 完全培养基配置

在无菌条件下，向MEM基础培养基中加入100ml优质胎牛血清（使血清终浓度为10%）

加入10ml青霉素-链霉素混合液（使双抗终浓度为1%）

若需要筛选TK-细胞，加入5-溴-2'-脱氧尿苷，使其终浓度为0.015mg/ml

轻轻摇晃血清瓶，使各成分充分混合，标注培养基名称及配置日期

4℃避光保存，使用前提前放置至室温

4. 培养基质量检测

配置完成后，取少量培养基接种于无菌培养瓶中，37℃、5%CO₂培养箱中培养24-48小时

观察培养基是否浑浊、有无菌落生长，确认无菌后方可用于细胞培养
性能检测与验证方法：

1. 无菌与内毒素检测

无菌检测：将培养基接种于细菌/真菌培养基，37℃培养14天，观察是否有菌落生长

内毒素检测：采用鲎试剂法或动态浊度法，定量检测培养基中内毒素含量

2. 细胞培养验证

细胞生长曲线：接种相同数量细胞，每天计数细胞数量，绘制生长曲线，评估培养基对细胞增殖的促进作用

形态学观察：定期用显微镜观察细胞形态，判断是否保持正常生长状态

标志物检测：通过免疫荧光、流式细胞术等方法检测细胞特异性标志物表达情况

功能实验：针对不同细胞类型设计特定功能实验，如内皮细胞血管形成实验、T细胞杀伤实验等
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