大肠杆菌表达宿主菌Rosetta 2(DE3) 新品

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大肠杆菌表达宿主菌Rosetta 2(DE3)是大肠杆菌的一种，是蛋白质表达中常用的宿主菌。它携带T7 RNA聚合酶基因，可在IPTG诱导下高效表达目的蛋白质。该菌株还携带稀有密码子tRNA基因，可提高含有稀有密码子的蛋白质的表达水平。在蛋白质工程和生物技术研究中具有重要应用价值。
培养基  酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，琼脂：15.0，氯霉素：50mcg/mL，pH：7.0(25℃)

生长条件  37℃；18-24h；好氧；

存储条件  2-8℃

安全等级  1

形态  菌落形态： 大小：1-2mm 形状：圆形 边缘：整齐 透明度：不透明 颜色：灰白色 隆起度：扁平 表面：明亮光滑 质地：湿润易挑起

模式菌株  未知

操作步骤  ①准备1支含有5~10mL液体培养基的试管和2个平板；②安全柜中打开，用酒精灯灼烧顶部，后迅速滴上无菌水使之破裂，随后用镊子将其敲碎；③吸取0.5mL液体培养基打入冻干管，充分溶解后重新打回液体试管中，混匀；④吸取0.2mL菌悬液打入平板中，涂布均匀，重复两次获得两个平板；⑤将液体试管和平板全部置于上述培养条件下培养，菌种长出即可使用。

应用领域  科研

共享方式  公益性共享

接种与培养：

1. 接种方法

液体培养基：将菌悬液或菌苔接种至液体试管中，倾斜试管轻轻晃动使菌液混匀。

固体平板：

涂布法：吸取 100-200 μL 菌液滴在平板表面，用无菌涂布棒涂布均匀。

划线法：用接种环蘸取菌液，在平板表面进行分区划线，以获得单菌落。

2. 培养条件

好氧菌：直接放入普通恒温培养箱。

兼性厌氧菌：可放入普通培养箱，或根据需要放入厌氧环境。

严格厌氧菌：必须立即放入厌氧罐/厌氧工作站，并放入厌氧产气包和指示剂。

温度与时间：通常为 37℃，培养 18-72小时（视菌种生长速度而定）。

菌种开启与复苏流程:

1. 提前准备（10分钟搞定）

把冻存管从液氮/超低温冰箱拿出，直接放进37℃水浴锅，手捏住管身轻轻晃动，1分钟内让冰块完全融化

同时准备好装有5ml液体培养基的无菌试管，不用提前预热

2. 快速接种（全程无菌操作）

用移液枪吸取融化后的菌液0.2ml，直接打进准备好的液体培养基试管里

拧紧试管盖，轻轻颠倒混匀3次

3. 复苏培养

把试管放进37℃摇床，设置转速180rpm，培养8-12小时即可观察菌液浑浊度，判断是否复苏成功

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