Top10大肠杆菌克隆菌株 新品

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Top10大肠杆菌克隆菌株是大肠杆菌的一种，是分子生物学研究中常用的克隆菌株。它具有高转化效率、低重组率等特点，常用于基因克隆、质粒扩增等实验。该菌株在分子生物学和生物技术研究中具有重要应用价值，是基因工程实验的重要工具。
培养基  酵母膏：5.0，蛋白胨：10.0，NaCl：10.0，pH：7.0（25℃）冷却至50℃左右加入终浓度50μg/mL链霉素

生长条件  37℃；18-24h；好氧；

存储条件  2-8℃

安全等级  1

形态  菌落直径为1-2mm，圆形，边缘整齐，不透明，正面灰白色，中间凸起，表面光滑，质地湿润，G－（红），杆菌，纯度：纯

模式菌株  未知

操作步骤  ①准备上述平板 1-2 块；②安全柜中打开，用酒精灯灼烧顶部，后迅速滴上无菌水使之破裂，随后用镊子将其敲碎；③吸取 0.5mL 无菌水打入冻干管，充分溶解菌粉后，打入平板中 200μL/个，涂布均匀；④将平板置于上述培养条件下培养，菌种长出即可使用。

应用领域  用于基因克隆，可用于构建克隆，蓝白斑筛选等实验

共享方式  公益性共享

菌种保藏方法：

一、传代保存法

对于一些稳定性不高，对环境变化较为敏感的微生物菌种，一般只能采用传代培养保存法。传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法。

二、液体石蜡覆盖保存法

该法适用于霉菌、酵母菌、放线菌及需氧细菌等的保存。此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。其方法简便，且适用于不宜冷冻干燥的微生物(如产孢能力低的丝状菌)的保存。

三、悬液保存法

这是一种使微生物混悬于适当溶液中进行保存的方法，具体方法有：

① 蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。

② 糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达10年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。

四、载体保存法

将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。常用的有方法包括以下几种：

①土壤保存法；

②砂土保存法；

③硅胶保存法；

④磁珠保存法；

⑤麸皮保存法

⑥纸片(滤纸)保存法。

实验内容：

1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查

2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物

3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查

4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌

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