活肿瘤组织冻存复苏试剂盒

活肿瘤组织冻存试剂盒（LT2601）

组织冻存管 X3  

组织支架 X3

组织冻存液：

     No.1 玻璃化液 1(V1) …………. 1X10ml 管

     No.2 玻璃化液 2(V2) …………. 1X10ml 管

组织冻存流程： 清洗、处理组织→玻璃化液 1、2→液氮玻璃化→储存

自备材料：

1. 生理盐水/1XPBS 2. 眼科剪 3. 眼科镊 4. 有齿镊 5. 平口镊 6. 组织处理模具及配套刀片（LT2603） 7. 无菌液氮 8. 无菌液氮盒 9. 秒表或计时器 10. 100mm 培养皿 X4 11. 无菌纱布 12. 水浴锅

操作步骤：

a. 在组织冻存管上记录清楚肿瘤组织的相关信息；

b. 水浴加热并维持玻璃化液 1、玻璃化液 2 为 26℃； 注意：在后续使用玻璃化液 1、玻璃化液 2 时，维持液温为 26℃，有利于提高组织复苏后 的存活率。

c. 在 100mm 培养皿中，用生理盐水清洗肿瘤组织，使用眼科剪、眼科镊修剪 去除血管、包膜以及坏死组织；

d. 使用组织处理模具将肿瘤组织切成 1mm 厚的薄片； 注意：经验证，组织切片的厚度为 1mm。

e. 在 100mm 培养皿中，用生理盐水再次清洗切好的组织，并用无菌纱布吸除 组织表面的液体；

f. 使用平口镊将肿瘤组织切片浸入 V1 管中的 10ml 玻璃化液 1 中，26℃， 25min ；

g. 将 V1 管中的液体及组织切片全部倒入 100mm 培养皿中，在移入 V2 管前使 用无菌纱布尽量将组织表面的玻璃化液 1 吸除； 注意：尽量减少组织切片从玻璃化液 1 移入玻璃化液 2 之间的操作时间。

h. 使用平口镊将组织切片移入 V2 管中的 10ml 玻璃化液 2 中，26℃， 15min 或 者待组织切片自然沉降至管底；

注意：如果组织切片在 15min 内没有自然沉降至 V2 管的管底，等待至其沉至管底；如果组织切片早于 15min 沉至管底，让组织切片在 V2 管内浸泡至少 15min。

i. 将组织切片平铺摆放于组织支架上；

j. 将组织支架平放于无菌纱布上，尽量吸除组织切片表面的液体；

k. 使用有齿镊将组织支架快速浸入无菌液氮，时间不少于 5min； l. 快速将组织支架移入组织冻存管内，旋紧冻存管，将冻存管移入液氮罐中保 存。

注意：在组织支架移入组织冻存管前，检查组织切片是否透明，透明的组织切片意味着组 织切片成功被玻璃化。  

活肿瘤组织复苏试剂盒（LT2602）

组织复苏液：

 No.1 复苏液 1 (T1) ………………… 1X30ml 管

 No.2 复苏液 2 (T2) ………………… 1X10ml 管

 No.3 复苏液 3 (T3) ……………… 1X10ml 管    

 No.4 复苏液 4 (T4) ……………… 1X10ml 管

自备材料：

1. 有齿镊 2. 平口镊 3. 无菌液氮 4. 无菌液氮盒 5. 秒表或计时器 6. 100mm 培养皿 X3 7. 水浴锅

操作步骤：

a. 水浴加热并维持复苏液 1 为 37℃，复苏液 2、3、4 为 26℃； 注意：在后续使用复苏液 1 时维持液温为 37℃，复苏液 2、3、4 时维持液温为 26℃， 有利于提高组织复苏后的存活率。  

b. 使用有齿镊在液氮中旋开组织冻存管并取出组织支架；

c. 迅速将组织支架沉浸入 37℃的复苏液 1 ，并不断轻摇 T1 管，待组织切 片从组织支架上脱落后，取出支架，让组织切片浸泡 3min； d. 将 T1 管中的液体及组织切片全部倒入 100mm 培养皿中，使用平口镊将组 织切片移入 T2 管中的 10ml 复苏液 2 中，26℃，5min； e. 将 T2 管中的液体及组织切片全部倒入 100mm 培养皿中，使用平口镊将组 织切片移入 T3 管中的 10ml 复苏液 3 中，26℃，10min； f. 将 T3 管中的液体及组织切片全部倒入 100mm 培养皿中，使用平口镊将组 织切片移入 T4 管中的 10ml 复苏液 4 中，26℃，10min，即获得复苏后 的肿瘤组织； g. 用生理盐水冲洗后即可移植于免疫缺陷小鼠体内建立 PDX 模型，或用于 其他研究。

注意：尽量减少组织切片从一种复苏液移入另一种复苏液之间的操作时间。