肠粘附性大肠杆菌PCR检测试剂盒 新品

本试剂盒针对肠粘附性大肠杆菌专属毒力基因研发PCR检测体系，可专一性检测样本中的该致病菌株核酸。产品特异性强、灵敏度高，能够精准区分肠粘附性大肠杆菌与其他肠道致病性大肠杆菌，适用于慢性腹泻、肠道感染的病原诊断及食品污染检测。

基础原理：

靶向 eaat 粘附毒力基因，粪便、食品样本细菌 DNA 特异性 PCR 鉴定粘附型菌株。

SYBR Green qPCR 扩增菌株粘附蛋白编码基因，熔解曲线区分其他致泻大肠杆菌。

食品匀浆增菌提取细菌核酸，致病型特异性引物扩增判定阳性污染。

‌操作步骤‌：

样本制备：

使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。

建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。

反应体系配制（20 μL体系示例）：

预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）

特异性引物混合液

模板DNA（2~5 μL）

补充无核酸酶水至终体积。

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。

结果判读：

阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；

可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。

‌注意事项‌：

所有耗材必须无核酸酶，吸头一次性使用，禁止重复吸取；

阳性模板拷贝浓度高，开盖操作轻柔，避免气溶胶扩散造成全域污染；

试剂融化后冰上放置不超过 2 h，用完立即放回 - 20℃；

废弃 PCR 管、扩增产物、实验废液统一 121℃高压灭菌后丢弃；

试剂盒仅用于动植物、水产、微生物疫病科研检测，禁止人体临床检测；

移液器、操作台定期紫外消毒，长期污染需更换全新试剂盒全套试剂。

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