溶血梭状芽孢杆菌PCR检测试剂盒 新品

本试剂盒基于荧光PCR技术，精准检测溶血梭状芽孢杆菌核酸，适配畜禽血液、组织、粪便及环境样本。溶血梭状芽孢杆菌可引发畜禽溶血性感染、败血症、肠道出血等重症，发病迅猛、致死率高，传统检测周期长，延误诊疗时机。本试剂盒检测快速、灵敏度高，可实现早期感染快速筛查，特异性优异，可精准区分各类梭状芽孢杆菌，为畜禽溶血类疫病的病因确诊、精准用药、疫情防控提供关键技术支撑。

基础原理：

动物病变组织核酸提取，溶血梭菌溶血毒素基因特异性引物 PCR，电泳判定致病菌。

单重荧光探针 qPCR，探针靶向溶血毒素编码区，精准区分非溶血型梭状芽孢杆菌。

芽孢富集耦合 PCR，试剂盒裂解液高效破碎芽孢，释放微量基因组 DNA 完成扩增。

‌操作步骤‌：

样本制备：

使用CTAB法或商业DNA提取试剂盒从组织中提取基因组DNA。

建议DNA浓度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。

反应体系配制（20 μL体系示例）：

预混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）

特异性引物混合液

模板DNA（2~5 μL）

补充无核酸酶水至终体积。

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60~95℃（可选，用于验证扩增特异性）。

结果判读：

阳性：Ct值≤35且熔解曲线峰单一；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线；

可疑：35<Ct值<40，建议复测或结合熔解曲线分析。

‌注意事项‌：

所有耗材必须无核酸酶，吸头一次性使用，禁止重复吸取；

阳性模板拷贝浓度高，开盖操作轻柔，避免气溶胶扩散造成全域污染；

试剂融化后冰上放置不超过 2 h，用完立即放回 - 20℃；

废弃 PCR 管、扩增产物、实验废液统一 121℃高压灭菌后丢弃；

试剂盒仅用于动植物、水产、微生物疫病科研检测，禁止人体临床检测；

移液器、操作台定期紫外消毒，长期污染需更换全新试剂盒全套试剂。

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