犬副流感病毒PCR检测试剂盒 新品

本试剂盒采用实时荧光PCR原理，用于特异性检测犬样本中的犬副流感病毒核酸，可适配犬鼻拭子、咽拭子、肺组织等呼吸道样本。针对犬副流感病毒传播速度快、易引发犬群呼吸道交叉感染的特点，试剂盒优化了核酸扩增体系，灵敏度高，可精准检出低病毒载量的隐性感染、早期感染样本，杜绝漏检。产品操作便捷、检测周期短，能够快速区分犬副流感与犬瘟热、犬腺病毒等相似症状呼吸道疫病，广泛应用于宠物临床诊疗、犬场疫病筛查、出入境宠物检疫等场景，助力犬类呼吸道疫病的早发现、早防控。

基础原理：

针对犬副流感病毒 NP 核蛋白保守序列设计特异性上下游引物，样本 RNA 经反转录后完成 PCR 扩增，依据扩增产物片段大小定性检测病毒。

荧光探针法 qRT-PCR，扩增时探针与病毒靶序列结合发光，通过荧光曲线有无区分样本是否携带犬副流感病毒。

巢式 RT-PCR 双重扩增，第一轮广谱引物扩增副流感病毒同源片段，第二轮特异性引物二次扩增，大幅降低低病毒载量样本漏检概率。

‌操作步骤‌：

1. DNA提取（样本制备区）

使用自选方法或兼容试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。

2. 标准曲线制备（独立操作区）

标记6管为梯度稀释点（如7-2），每管加45 μL DEPC水。

取5 μL阳性对照依次稀释，混匀后作为标准品（避免污染）。

3. PCR反应体系配制（试剂配制区）

按以下比例配制（示例）：

| 组分 | 体积（μL） |

| 2× Master Mix | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| DNA模板 | 2 |

| DEPC水 | 6 |

4. 上机检测

程序设置：预变性95℃ 3 min；40循环（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲线分析。

数据分析：根据Ct值及标准曲线计算样本浓度。

‌注意事项‌：

1、实验分区管理‌

实验全程需严格划分三个独立区域：‌试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区‌，各区实验服、移液器及耗材‌严禁混用‌，防止交叉污染。

‌2、防止污染操作‌

使用带滤芯枪头，每步更换枪头；

阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行，避免污染其他试剂；

加样后立即盖紧管盖，避免气溶胶扩散。

‌3、试剂保存与使用‌

所有试剂需‌-20℃避光保存‌，避免反复冻融，确保稳定性；

使用前于冰上解冻并轻柔混匀，瞬时离心后使用。

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