牛仰口线虫PCR检测试剂盒 新品

本试剂盒依托PCR特异性扩增原理，靶向牛仰口线虫基因组保守序列，可检测牛粪便、肠道组织、血液样本中的虫体核酸，实现牛仰口线虫感染的分子生物学诊断。牛仰口线虫是牛常见消化道寄生虫，易引发牛贫血、消瘦、肠道损伤，试剂盒可精准检出轻度感染与隐性感染，弥补传统镜检的不足。适用于规模化牛场寄生虫筛查、感染确诊、驱虫效果评估及畜禽寄生虫病防控。

基础原理：

提取牛粪中线虫虫卵 DNA，qPCR 靶向牛仰口线虫 ITS 间隔区特异性序列，荧光探针检出虫体核酸。

普通 PCR 扩增线虫肌动蛋白特有基因，电泳条带区分牛仰口线虫与其他消化道线虫。

粪便虫卵富集后磁珠提纯 DNA，大幅降低粪便杂质对 PCR 扩增的抑制。

‌操作步骤‌：

1. DNA提取（样本制备区）

使用自选方法或兼容试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL，A260/A280比值1.8-2.0。

2. 标准曲线制备（独立操作区）

标记6管为梯度稀释点（如7-2），每管加45 μL DEPC水。

取5 μL阳性对照依次稀释，混匀后作为标准品（避免污染）。

3. PCR反应体系配制（试剂配制区）

按以下比例配制（示例）：

| 组分 | 体积（μL） |

| 2× Master Mix | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| DNA模板 | 2 |

| DEPC水 | 6 |

4. 上机检测

程序设置：预变性95℃ 3 min；40循环（95℃ 10 s, 60℃ 30 s）；熔解曲线分析。

数据分析：根据Ct值及标准曲线计算样本浓度。

‌注意事项‌：

1、实验分区管理‌

实验全程需严格划分三个独立区域：‌试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区‌，各区实验服、移液器及耗材‌严禁混用‌，防止交叉污染。

‌2、防止污染操作‌

使用带滤芯枪头，每步更换枪头；

阳性对照操作应在专用生物安全柜中进行，避免污染其他试剂；

加样后立即盖紧管盖，避免气溶胶扩散。

‌3、试剂保存与使用‌

所有试剂需‌-20℃避光保存‌，避免反复冻融，确保稳定性；

使用前于冰上解冻并轻柔混匀，瞬时离心后使用。

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