大鼠破骨细胞分化因子(ODF)ELISA试剂盒

本试剂盒运用双抗体夹心ELISA检测原理，以纯化的大鼠破骨细胞分化因子（ODF）单克隆抗体作为固相包被抗体，固定于酶标板微孔。加入待测样本和梯度标准品后，样本中的ODF抗原可与固相抗体特异性结合，孵育洗板后加入对应的酶标记检测抗体，形成稳定的免疫夹心复合物。再次洗涤去除多余游离抗体后，加入底物液催化显色，有色产物的吸光度值与样本中ODF的含量呈正比例关系，通过标准曲线回归计算，即可准确测定大鼠样本中破骨细胞分化因子的浓度。
产品参数：

‌灵敏度：最低检测值0.2pg/mL，可精准检测大鼠骨组织、血清中微量ODF细胞因子。

检测范围：0.5pg/mL - 100pg/mL，适配大鼠骨质疏松、骨损伤、骨代谢相关模型检测。

反应时间：全流程反应150分钟，包含长时间抗原结合孵育，保障低丰度因子充分结合。

保存条件：试剂整体2 - 8℃避光保存，标准品、浓缩抗体组分需单独密封存放，防止失活。

有效期：未开封试剂盒有效期6个月，低温恒定保存可维持活性稳定。

特异性：特异性识别大鼠ODF蛋白，与骨保护素、RANKL等骨代谢相关因子无交叉反应。

重复性：板内CV≤6%，板间CV≤8%，平行实验数据重复性良好。

注意事项：骨组织匀浆样本需充分裂解、离心去除杂质；低浓度样本可适当延长孵育时间；所有试剂使用前需恢复室温。
实验前准备工作：

1. 试剂平衡与稀释

试剂盒所有组分（酶标板、标准品、酶结合物、底物、洗涤浓缩液、样本稀释液、终止液）从 2~8℃取出，室温（20~25℃）放置平衡 30min，严禁直接低温操作。

浓缩洗涤液配制：按标签标注比例用去离子纯水稀释（常见 20× 浓缩液：1 份浓缩液 + 19 份纯水），混匀备用，现配现用。

标准品复溶 / 梯度稀释：

冻干标准品加入配套标准品稀释液充分溶解，室温静置 10min，轻柔吹打混匀；

按说明书梯度倍比稀释出 5~7 个浓度梯度标准品，单独标记，剩余原液分装 - 20℃避光保存，避免反复冻融。

待测样本预处理：血清 / 血浆、组织匀浆、细胞上清用样本稀释液适当稀释，浑浊样本 12000r/min 离心 10min 取上清；溶血、脂血严重样本弃用。

2. 耗材与设备准备

设备：恒温 37℃孵育箱、酶标仪（450nm 主波长，630nm 参比）、多通道移液枪、吸水滤纸、洗板机（或手动洗板槽）、封板膜、离心管。

耗材无核酸酶、无热源、无蛋白污染，移液枪提前校准。

取出本次实验所需酶标板条，剩余未使用板条装入铝箔密封袋，加干燥剂 2~8℃避光保存。

3. 孔位规划标记

酶标板做好分区标记：空白孔、零标准孔、梯度标准品孔、待测样本孔、复孔（所有样本、标准品建议设置双复孔降低误差）。

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实验操作流程：

1. 试剂盒全部试剂室温平衡 35min，稀释浓缩洗涤液；细胞上清样本离心去除细胞碎屑备用。

2. 划分酶标板孔位，标准品孔加入梯度 ODF 标准品 50μL，样本孔加入待测上清 50μL，空白孔不加试剂。

3. 一步法同步向加样孔加入酶结合物工作液 100μL，封板膜密封酶标板边缘。

4. 37℃恒温避光孵育 70min，期间保持孵箱温度稳定。

5. 去除封板膜，倒掉孔内液体，加满洗涤液浸泡 40s，洗板 5 次，吸水纸拍干微孔。

6. 依次加入显色液 A、B 各 50μL，混匀后 37℃避光显色 20min。

7. 加入终止液终止反应，酶标仪 450nm 读数，绘制标准曲线定量 ODF 表达量。