RIPA裂解液 RIPA组织/细胞裂解液(带附件:PMSF1.5mL)

RIPA组织/细胞裂解液使用说明书

货号：D02680    

规格：100mL

本产品配有一支PMSF（100mM，1.5mL）

保存：RIPA裂解液4℃保存，PMSF -20℃保存。

产品简介：

RIPA组织/细胞裂解液是利用表面活性剂等来裂解细胞膜（包括核膜）。本试剂提取的蛋白为可溶性总蛋白。

使用说明：

如发现RIPA有沉淀，请放室温半小时或者常温水浴使沉淀溶解。

根据使用量，取每1mL RIPA加入10uL PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，混匀备用（PMSF现用现加）。

1、样品前处理： 

a)对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照6孔板每孔细胞量加入150-250uL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。

b)对于悬浮细胞：离心收集细胞，按照6孔板每孔细胞量加入150-250uL裂解液的比例加入裂解液，用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成5-10×10⁵细胞/管，然后再裂解。

c)对于组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250uL裂解液的比例加入裂解液(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量) 。用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

2、后处理：

将裂解后的样品10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。

注意事项：

1、  使用本裂解液可以裂解细胞核，释放出核蛋白的同时，也会将基因组一并释放出来，造成细胞裂解液粘稠，此时可以直接加入蛋白上样缓冲液煮沸再离心，离心后直接上样电泳；若想测定浓度，可入加少量SDS（1%），煮沸后离心测浓度。

2、  本系列蛋白提取试剂所提取的蛋白由于含有去污剂，所以不适合使用Bradford蛋白浓度测定试剂盒，请选择BCA法或者Lowry法检测蛋白浓度。

3、  如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散粘稠状物，随后离心取上清用于后续实验。