磷脂酰肌醇激酶3催化亚单位3抗体 新品

产品属性

商品介绍

产品应用:

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Optimal working dilutions must be determined by the end user.

英文别名:PI 3 Kinase Class 3; Phosphatidylinositol 3 kinase catalytic subunit type 3; Phosphatidylinositol 3 kinase class 3; Phosphatidylinositol 3 kinase p100 subunit; phosphoinositide 3 kinase class 3; PI3 kinase type 3; PI3K type 3; PIK3C3; PtdIns 3 kinase type 3; Vps 34; Vps34; hVps34; MGC61518; PIK3C3; PI3 Kinase p100; PK3C3_HUMAN.

交叉反应:Human,Mouse,Rat

抗体来源:Rabbit

免疫原:KLH conjugated synthetic peptide derived from human PIK3C3/PI3 kinase type 3

亚型:IgG

性状:Liquid

纯化方法:affinity purified by Protein A

克隆类型:Polyclonal

理论分子量：98 kDa

浓度：1mg/ml

储存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.

保存条件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.

注意事项：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

原理特点

该抗体靶向PI3K催化亚单位3蛋白，该亚基是PI3K激酶的核心功能结构域，决定激酶催化活性与底物结合能力，主导磷脂酰肌醇磷酸化修饰与下游信号激活。该抗体可检测催化亚单位表达水平，评估PI3K整体催化活性；同时可封闭催化结构域，完全抑制PI3K激酶功能，阻断经典PI3K-AKT通路活化，助力研究细胞增殖、肿瘤发生、代谢调控机制。

靶点背景

靶点背景：Vps34 是 III 类 PI3K，唯一生成 PI3P，主导自噬起始、内体分选、囊泡转运、溶酶体成熟。

作用机制：针对 Vps34 全长蛋白制备，特异性区别 I/II 类 PI3K 家族分子。

产品特点：自噬、胞内囊泡运输专用检测抗体，WB、细胞荧光定位自噬囊泡，用于神经自噬、肿瘤自噬调控实验。

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样本处理与实验操作

1. Western Blot（免疫印迹）

样本制备

细胞样本：PBS洗涤2-3次，加入RIPA裂解液（含1% PMSF和磷酸酶抑制剂），冰上裂解30分钟，12000rpm离心15分钟取上清，BCA法定量蛋白浓度

组织样本：液氮研磨成粉末，加入裂解液冰上裂解，离心后取上清，调整蛋白浓度至一致

变性处理：加入5×SDS上样缓冲液，95℃加热5-10分钟，冷却后上样

抗体孵育

转膜完成后，用5% BSA或牛奶封闭液室温封闭1-2小时

一抗稀释后4℃孵育过夜（12-16小时），或室温孵育1-2小时；孵育时保证膜完全浸没在抗体溶液中

TBST缓冲液洗涤3次，每次5分钟；加入二抗（1:5000-1:10000稀释）室温孵育1-2小时

再次洗涤后，用ECL发光液显影，通过凝胶成像系统采集图像

2. IHC-P（石蜡切片免疫组化）

样本前处理

脱蜡水化：依次放入二甲苯（2次，每次10分钟）、无水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇（各5分钟），最后用PBS冲洗

抗原修复：将切片放入柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）中，微波炉加热至沸腾，保持10-15分钟，自然冷却至室温

封闭处理：3% H₂O₂室温孵育10分钟灭活内源性过氧化物酶，PBS冲洗后用10%山羊血清封闭30分钟

抗体孵育

一抗稀释后滴加在切片上，4℃孵育过夜；孵育时置于湿盒中，防止液体挥发

次日室温复温30分钟，PBS冲洗3次，每次5分钟；加入二抗（生物素标记）室温孵育30分钟

PBS冲洗后，加入ABC复合物室温孵育30分钟，DAB显色剂显色（显微镜下观察控制时间，通常3-10分钟），苏木素复染后脱水封片

3. ICC/IF（细胞免疫荧光）

样本制备

细胞爬片培养至70-80%汇合度，PBS洗涤2次，4%多聚甲醛固定15-20分钟

通透处理（根据抗体类型选择）：0.1% Triton X-100室温孵育10分钟，PBS冲洗3次

封闭处理：5% BSA室温封闭30-60分钟，减少非特异性结合

抗体孵育

一抗稀释后滴加在爬片上，4℃孵育过夜，或室温孵育1-2小时

PBS冲洗3次，每次5分钟；加入荧光标记二抗（1:200-1:500稀释），室温避光孵育30-60分钟

再次冲洗后，用抗淬灭封片液封片，荧光显微镜或共聚焦显微镜下观察采集图像

4. ELISA（酶联免疫吸附试验）

包被与封闭

用包被缓冲液（如碳酸盐缓冲液pH9.6）稀释抗原至合适浓度，每孔加入100μl，4℃包被过夜

弃去包被液，PBST洗涤3次，每次3分钟；加入封闭液（5% BSA）每孔200μl，37℃孵育1-2小时

抗体孵育

一抗按比例稀释后，每孔加入100μl，37℃孵育1-2小时，或4℃孵育过夜

PBST洗涤3次，加入稀释好的酶标二抗，每孔100μl，37℃孵育1小时

洗涤后加入底物溶液（如TMB）每孔100μl，37℃避光显色10-20分钟，加入终止液（2M H₂SO₄），用酶标仪在450nm波长读取OD值