磷酸化B-Raf抗体 新品

产品属性

商品介绍

产品应用:

Not yet tested in other applications.

Optimal working dilutions must be determined by the end user.

英文别名:B Raf(phospho S729); p-B Raf(phospho S729); BRAF_HUMAN; Serine/threonine-protein kinase B-raf; EC:2.7.11.1; BRAF1; RAFB1; Proto-oncogene B-Raf; p94; v-Raf murine sarcoma viral oncogene homolog B1; B-Raf proto-oncogene, serine/threonine kinase; NS7; B-raf; B-RAF1; BRAF-1; 94 kDa B raf protein;

交叉反应:Human,Mouse,Rat

抗体来源:Rabbit

免疫原:KLH conjugated synthesised phosphopeptide derived from human BRAF around the phosphorylation site of Ser729

亚型:IgG

性状:Liquid

纯化方法:affinity purified by Protein A

克隆类型:Polyclonal

理论分子量：94 kDa

浓度：1mg/ml

储存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.

保存条件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.

注意事项：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

原理特点

磷酸化B-Raf是Raf/MAPK通路的活化关键蛋白，接收上游Ras信号后磷酸化活化，启动下游ERK级联反应，调控细胞增殖、分化与肿瘤恶变。该抗体特异性识别B-Raf磷酸化活化位点，精准检测通路活化水平；同时可结合活化蛋白阻断其激酶活性，抑制下游增殖信号传导，阻断肿瘤细胞异常增殖。

靶点背景

靶点背景：B-Raf 是 MAPK 通路上游激酶，Ser338 等位点磷酸化代表激活，BRAF 突变是黑色素瘤、肺癌驱动突变。

作用原理：免疫原为磷酸化位点特异性多肽，仅结合活化磷酸化 B-Raf，无总 B-Raf 交叉识别。

产品特点：WB、IHC 精准检出通路活化水平；用于 BRAF 靶向药药效、实体瘤突变型通路活性检测。

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实验操作过程注意事项

抗体稀释

使用专用抗体稀释液或含BSA的缓冲液稀释抗体，避免用纯水稀释（纯水中无盐分会导致抗体变性）；

严格按照说明书的建议稀释比例进行稀释，若说明书未提供，可通过预实验确定最佳稀释比例（通常1:500-1:10000）；

稀释后的抗体需一次性用完，未用完的部分不可再次冻存。

抗体孵育

一抗孵育：通常4℃孵育过夜，可减少非特异性结合，避免室温孵育时间过长导致抗体变性；

二抗孵育：室温孵育1-2小时，孵育期间需避光（荧光二抗）；

孵育时需保证抗体均匀覆盖样本表面，避免产生气泡；

实验过程中使用封闭液（如5%BSA或脱脂牛奶）封闭非特异性结合位点，减少背景信号。

洗涤步骤

每步孵育后，需用PBST或TBST洗涤3-5次，每次5分钟，彻底去除未结合的抗体；

洗涤时需轻轻晃动培养板或载玻片，避免用力过猛导致样本脱落；

洗涤液需新鲜配制，避免使用过期或变质的洗涤液。