小鼠胚胎成纤维Psi2DAP细胞 新品

别称Psi2-DAP; Psi-2-DAP; Psi-2 DAP

种属小鼠

年龄（性别）胚胎

组织来源 正常胚胎

生长特性 贴壁细胞

细胞形态 成纤维细胞样

背景描述 Psi2 DAP细胞生成一种可以感染小鼠细胞的载体。Psi2 DAP细胞生成的载体编码了人类胎盘碱性磷酸酯酶基因和新霉素抗性基因，Psi2 DAP细胞通过Psi2细胞插入一个重组的逆转录病毒(DAP)基因组衍生而来。被这种Psi2 DAP细胞产生的载体感染的细胞表达的磷酸酯酶可用组织化学方法检测，可以用作体内追踪它们命运的标记；Psi2 DAP细胞也可能产生辅助病毒。

生物安全等级 1

生长培养基 DMEM＋10% FBS＋1% P/S

推荐传代比例 1:3-1:4推荐换液频率2~3次/周

冻存条件冻存液：55% 

基础培养基+40%FBS+5%DMSO

温度：液氮培养条件气相：空气，95%；CO2，5%

温度：37℃

基因表达情况a human placental alkaline phosphatase transducing vector保藏机构ATCC; CRL-1949

细胞收到后处理：

细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松）

细胞培养步骤：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。