禽副粘病毒通用染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

试剂组成

扩增液：100μL×1管

反应液：900μL×1管

阳性质控品：50μL×1管（含已知浓度DNA片段，避免活病毒污染风险）

阴性质控品：50μL×1管

说明书：1份

注意事项：

不同批号试剂不可混用，组分数量与包装标示检测次数一致。

需自备无DNA/RNA酶的耗材（如离心管、滤芯吸头）及仪器（离心机、移液器等）。

储存与运输

条件：-20℃±5℃避光保存，避免反复冻融（限7次内）。

有效期：12个月。

适用仪器

支持ABI、MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等主流荧光定量PCR仪。

样本要求

类型：全血、血清、血浆、口腔/咽喉拭子、病毒培养物等（需符合《临床微生物样本采集规范》）。

保存：短期-20℃；长期-70℃以下，避免交叉污染。

操作步骤

标准品稀释（以6个10倍梯度为例）：

标记离心管（7-2号），每管加45μL稀释液。

7号管加入5μL阳性对照（1×10^8拷贝/μL），震荡后得1×10^7拷贝/μL，依次稀释至1×10^2拷贝/μL。

操作需在独立区域进行，防止污染。

反应体系配制（20μL体系）：

| 组分 | 体积 |

| 扩增液 | 2μL |

| 反应液 | 10μL |

| 模板RNA/DNA | 5μL |

| 超纯水 | 补至20μL |

PCR程序：

逆转录：50℃ 30分钟

预变性：94℃ 10分钟

扩增（40循环）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM通道信号）

结果判读

定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，推算样本浓度。

定性检测：

阴性：Ct≥40；阳性：Ct≤35。

35<Ct<40需复测，复测Ct<35判为阳性。

注意事项

实验需设置阴阳性对照，确保扩增曲线正常（阳性Ct≤30，阴性Ct≥40）。

避免试剂反复冻融，分装保存以维持稳定性。

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