流感嗜血杆菌B型染料法荧光定量PCR试剂盒

流感嗜血杆菌B型染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品用途

专用于科研实验中流感嗜血杆菌B型核酸的定性或定量检测，不可用于临床诊断。

检测原理

基于染料法荧光定量PCR技术，通过特异性引物扩增靶序列，结合荧光信号实时监测扩增产物。

灵敏度：可检测低至几百拷贝/反应的病毒核酸。

特异性：针对流感嗜血杆菌B型保守序列设计引物，与其他常见病原体无交叉反应。

规格与成分

规格：50次/盒（20 μL反应体系）。

主要成分：

试剂一：2×qPCR MagicMix（预混酶、dNTPs、缓冲液等），500 μL（棕色管）。

试剂二：荧光PCR专用模板稀释液，1 mL（黄盖）。

试剂三：流感嗜血杆菌B型特异性引物混合液，100 μL（白盖）。

保存与运输

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

有效期：6个月至1年（不同略有差异）。

运输：低温（冰袋或干冰）运输。

操作步骤

样本处理：提取待测样本RNA/DNA，使用试剂二稀释模板。

反应体系配制（以20 μL为例）：

2×qPCR MagicMix：10 μL

引物混合液：2 μL

模板DNA：2 μL

无核酸酶水：补足至20 μL

PCR程序设置：

预变性：94℃ 5 min（1循环）

扩增循环（30-40次）：

变性：94℃ 10 sec

退火：50-65℃（依引物Tm值优化） 20 sec

延伸：72℃ 30 sec/kb（片段≤1 kb时建议30 sec）

终延伸：72℃ 5 min（1循环）

注意事项

退火温度优化：建议低于引物理论Tm值2-5℃，通过梯度PCR确定最佳条件。

污染控制：

分装试剂，避免反复冻融。

实验分区操作（样本处理区、PCR扩增区、产物分析区）。

异常结果处理：

无扩增信号：检查试剂活性、引物特异性或重新优化反应条件。

非特异性条带：调整退火温度或更换引物。

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