柯萨奇病毒A24型变种染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

预期用途

本试剂盒用于定性检测人结膜拭子、咽拭子、粪便或其它临床样本中的柯萨奇病毒A24型变种（CVA24v）RNA。适用于：

急性出血性结膜炎（AHC）病原体筛查

疫情暴发时的快速病原鉴定

流行病学调查

注：结果需结合临床表现及其他诊断指标综合判断，不可作为唯一诊断依据。

检测原理

RNA提取：样本中病毒RNA通过裂解液释放并纯化。

逆转录（RT）：提取的RNA逆转录为cDNA。

荧光定量PCR（qPCR）：

采用特异性引物靶向CVA24v保守区域（如VP1基因）。

DNA染料法（如SYBR Green/Evagreen）：与双链DNA结合后发射荧光信号，实时监测扩增进程。

通过Ct值（循环阈值）判定病毒载量。

主要组成成分

| 组分 | 规格（96测试） | 保存条件 |

| CVA24v RT-PCR预混液 | 1.2 mL × 1管 | -20℃ |

| 逆转录酶 | 40 μL × 1管 | -20℃ |

| RNase-Free水 | 1 mL × 1管 | 室温 |

| CVA24v阳性对照 | 200 μL × 1管（假病毒）| -70℃ |

| 阴性对照 | 1 mL × 1管（生理盐水）| 4℃ |

储存及有效期

储存条件：-20℃避光保存（避免反复冻融）

有效期：12个月

样本要求

| 样本类型 | 采集/处理要求 |

| 结膜/咽拭子 | 置于病毒保存液中，2-8℃保存≤72小时；长期储存需-70℃冻存。 |

| 粪便 | 取1-2g悬浮于PBS中，离心取上清液。 |

| 运输条件 | 冰袋（2-8℃）或干冰（-70℃）运输，符合UN3373生物安全要求。 |

检测流程

1. RNA提取

推荐使用商业化RNA提取试剂盒（如QIAamp Viral RNA Kit）。

2. RT-PCR反应体系配制（以20μL体系为例）

| 组分 | 体积 |

| RT-PCR预混液 | 10 μL |

| 逆转录酶 | 0.5 μL |

| RNA模板 | 5 μL |

| RNase-Free水 | 补足至20 μL|

3. 扩增程序（需在荧光定量PCR仪上运行）

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 信号采集 |

| 逆转录 | 50℃ | 15 min | 1 | 否 |

| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 | 否 |

| PCR扩增 | 95℃ | 10 sec | 40 | 是 |

| | 60℃ | 30 sec | | 是 |

| 熔解曲线分析 | 65℃→95℃ | 0.5℃/sec | 1 | 是 |

结果判读

阳性：

Ct值 ≤ 38.0，且熔解曲线峰值温度与阳性对照一致（如82.5±1℃）。

阴性：

Ct值 = 40 或无扩增曲线。

无效：

阳性对照Ct值＞38 或阴性对照出现扩增 → 实验需重做。

性能参数

灵敏度：检出限（LOD）≤ 50 copies/mL

特异性：

不与其他常见肠道病毒（如EV70、CA16、EV71）交叉反应；

与腺病毒、流感病毒无交叉。

符合率：与Sanger测序相比，阳性/阴性符合率均 ≥ 98%。

注意事项

本试剂盒仅限专业人员在生物安全二级（BSL-2）实验室使用。

所有样本需视为潜在传染性物质，操作时穿戴防护装备。

避免试剂反复冻融（建议分装保存）。

熔解曲线分析是鉴别非特异性扩增的关键步骤。

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