鲤春病毒血症病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

预期用途

本试剂盒基于实时荧光定量PCR技术，用于定性检测鲤春病毒血症病毒（SVCV），适用于鱼类样本的病原诊断及流行病学监测。

检验原理

通过设计针对SVCV基因组高度保守区域的特异性引物和探针，在PCR扩增过程中释放荧光信号。利用荧光定量PCR仪实时监测信号强度，实现对靶基因的定性分析。

主要组成成分

SVCV RT-PCR反应液：25T/盒含437.5 μL×1管，50T/盒含875 μL×1管。

SVCV混合酶液：25T/盒含62.5 μL×1管，50T/盒含125 μL×1管。

阳性对照：40 μL×1管（含SVCV靶基因质粒）。

阴性对照：40 μL×1管（灭菌纯水）。

说明书：1份。

储存条件及有效期

避光保存于-20℃以下，避免反复冻融，有效期12个月。

适用仪器

兼容主流荧光定量PCR仪，包括：

ABI系列（如7500、QuantStudio）

Bio-Rad系列（如CFX96）

Roche LightCycler 480

杭州博日系列等。

样本要求

有临床症状的鱼：

体长≤4 cm：取整条鱼。

体长4~6 cm：取内脏（含肾）。

体长>6 cm：取脑、肝、肾、脾。

无症状鱼：取肾、脾、鳃及脑组织；成熟雌鱼需额外采集卵巢液。

检验方法

试剂准备：

试剂解冻后混匀，瞬时离心去除管壁液体。

按反应数（n）计算各组分用量，参考下表配制反应体系（示例为20 μL体系）：

| 组分 | 单次反应体积 |

| RT-PCR反应液 | 17.5 μL |

| 混合酶液 | 2.5 μL |

| 模板DNA/对照 | 5 μL |

PCR程序设置：

逆转录：50℃ 15分钟（可选，若含RT步骤）。

预变性：95℃ 3分钟。

扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）。

结果判读：

阳性：Ct值≤35且扩增曲线呈S型。

阴性：无Ct值或Ct值>35。

注意事项

实验分区操作（试剂准备区、样本制备区、扩增区），避免交叉污染。

阳性对照需单独处理，防止污染其他组分。

失效或反复冻融的试剂可能影响检测灵敏度。

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