莫氏立克次体（现名伤寒立克次体）染料法荧光定量PCR试剂盒

产品特点

即开即用：预混优化试剂，用户仅需提供DNA模板。

高特异性：引物针对Rickettsia typhi保守序列设计，无交叉反应。

灵敏度高：检测下限可达10²拷贝/μL，线性范围覆盖5个数量级（10²~10⁷拷贝/μL）。

内置对照：含阳性对照（非活体DNA片段，10⁸拷贝/μL）及上样染料，便于结果判读。

双重应用：支持定性与定量检测，兼容常规PCR仪及荧光定量PCR仪。

试剂盒组分

| 成分 | 包装规格 | 说明 |

| PCR预混液（含染料） | 1 mL | 含dNTPs、Taq酶、Mg²⁺等 |

| 阳性对照DNA | 50 μL（10⁸拷贝/μL） | 需独立存放，避免污染 |

| 核酸释放剂（选配） | 1 mL | 用于样本前处理 |

| 超纯水 | 1 mL | 稀释模板用 |

| 使用说明书 | 1份 | 含操作流程及数据分析方法 |

实验步骤

1. 样本制备

提取待测样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL。

2. 阳性对照稀释（梯度制备）

按10倍梯度稀释阳性对照（10⁸拷贝/μL）至10²~10⁷拷贝/μL，用于标准曲线绘制。

3. PCR反应体系

每20μL反应体系：

预混液10 μL

引物混合液2 μL

模板DNA 2 μL

超纯水补至20 μL

4. 扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 |

| 变性 | 95℃ | 15 sec | 40 |

| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | |

| 荧光采集 | 60℃ | 30 sec | |

5. 数据分析

通过Ct值与标准曲线计算样本拷贝数，阈值设定为扩增曲线指数增长初期。

注意事项

实验分区操作，避免气溶胶污染。

阳性对照需单独存放，使用后彻底清洁工作台。

试剂解冻后需涡旋混匀，避免反复冻融（≤3次）。

本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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