杜氏利什曼虫(黑热病病原虫)染料法荧光定量PCR试剂盒

检验原理

本试剂盒基于SYBR Green染料法实时荧光定量PCR技术，针对杜氏利什曼虫基因保守区域设计特异性引物，通过荧光信号实时监测核酸扩增过程，实现病原体核酸的定性和定量检测。

试剂组成

Ld扩增液：50μL ×1管

Ld反应液（含SYBR Green Mix）：950μL ×1管

阳性质控品（1×10⁸ copies/μL）：50μL ×1管

阴性质控品（无核酸酶水）：50μL ×1管

说明书：1份

储存条件及有效期

-20℃避光保存，避免反复冻融（≤7次），有效期12个月。

适用仪器

兼容ABI系列、Bio-Rad CFX、Roche LightCycler、Eppendorf等主流荧光定量PCR仪。

自备耗材：无核酸酶的PCR管、离心管、滤芯吸头（10/200/1000μL）、移液器及离心机。

样品要求

样本类型：全血、骨髓穿刺液或组织样本，采集需符合《病原微生物样本操作规范》。

保存条件：短期（1周内）可存于-20℃，长期需-70℃保存，避免反复冻融。

运输：冰袋（2~8℃）运输，严禁冻融循环。

使用方法

DNA提取

使用兼容的核酸提取试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL。

标准曲线制备（定量检测需选做）

将阳性质控品按10倍梯度稀释（10⁷~10² copies/μL），用于建立标准曲线。

反应体系配制（试剂准备区）

每20μL体系包含：

Ld反应液 18μL

DNA模板 2μL

（阴性对照以水替代模板，阳性对照使用10⁵ copies/μL标准品）

扩增程序

预变性：95℃ 5分钟

循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（40循环，采集荧光信号）

熔解曲线分析：60~95℃（0.5℃/秒）

结果判读

定性：Ct值≤35且熔解曲线峰值单一判为阳性。

定量：根据标准曲线计算拷贝数。

注意事项

不同批号组分不可混用，避免污染。

本产品仅限科研使用，临床诊断需经额外验证。

操作需分区（试剂配制、样本处理、扩增区），穿戴防护装备。

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