硕大利什曼原虫染料法荧光定量PCR试剂盒

产品概述

本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术开发，专用于硕大利什曼原虫（Leishmania major）的定性和定量检测。适用于科研用途，具有高灵敏度和特异性，操作便捷，兼容常规核酸提取方法。

产品特点

即开即用：仅需提供样品DNA模板，无需额外优化引物或反应体系。

高灵敏度与特异性：引物针对硕大利什曼原虫保守序列设计，避免与其他病原体交叉反应。

双重检测功能：支持定性和定量分析，定量线性范围达5个数量级。

内置对照：含阳性对照（1×10^8拷贝/μL），便于区分假阴性结果。

兼容性：适配多数市售核酸提取试剂盒，标准20μL反应体系，可完成50次检测。

试剂盒组成

PCR MagicMix 3.0（预混染料法qPCR试剂，含荧光染料）

硕大利什曼原虫特异性引物混合液

阳性对照（1×10^8拷贝/μL）

阴性对照（DEPC-H2O）

超纯水（无核酸酶）

详细使用手册

储存与运输

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月；阳性对照需单独存放。

运输方式：低温干冰运输。

实验步骤

DNA提取

使用自选方法提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL，OD260/280为1.7-2.0。

标准曲线制备（定量检测需选）

将阳性对照梯度稀释（10^7至10^2拷贝/μL），每稀释步骤更换枪头。

若仅定性检测，稀释至10^5拷贝/μL即可。

反应体系配制

每20μL反应体系包含：

10 μL PCR MagicMix

2 μL 引物混合液

2 μL 模板DNA（样本/对照）

6 μL 超纯水

qPCR程序

预变性：95℃ 3分钟

循环步骤（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）

结果分析

定量：根据标准曲线计算拷贝数。

定性：Ct值≤35且扩增曲线呈S型判为阳性。

注意事项

分区操作：模板添加与扩增需在不同区域进行，避免污染。

质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。

用途限制：仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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