链球菌属通用染料法荧光定量PCR试剂盒

检验原理

本试剂盒基于SYBR Green染料法实时荧光定量PCR技术，针对链球菌属（Streptococcus spp.）基因高度保守区域设计特异性引物，通过体外扩增检测样本中的链球菌核酸。反应过程中，荧光信号与PCR产物积累量成正比，通过仪器实时监测荧光强度，实现定性或定量分析。

产品特点

高灵敏度：优化的引物设计可检测低拷贝数靶序列。

高特异性：引物经严格验证，避免与其他微生物核酸交叉反应。

即开即用：预混反应体系，用户仅需提供DNA模板。

双重功能：支持定性和定量检测，定量线性范围达5个数量级。

内置对照：提供阳性对照（非活体DNA片段），便于结果判读。

适用样本类型

临床样本：血液（EDTA抗凝）、病灶分泌物、咽拭子等。

食品及环境样本：需按标准预处理（如增菌培养）。

操作步骤

样本处理

DNA提取：使用商业化核酸提取试剂盒或酚-氯仿法提取样本DNA。

模板稀释：建议将DNA稀释至Ct值20-30范围内（可用无菌超纯水或专用稀释缓冲液）。

PCR反应体系配置（20 μL/反应）

| 组分 | 体积（μL） |

| 2×预混液 | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| DNA模板 | 2 |

| RNase-free H₂O| 补足至20 |

PCR程序设置

预变性：95℃, 3分钟；

扩增循环（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60℃至95℃，每0.5℃递增。

注意事项

防污染措施：

分区操作（样本准备区、PCR配置区、扩增区）。

使用带滤芯枪头，避免气溶胶污染。

质量控制：

每批实验需设置阴性对照（无模板水对照）及阳性对照。

熔解曲线需为单一峰，否则提示非特异性扩增。

储存及有效期

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

有效期：12个月。

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