禽病毒性关节炎染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

禽病毒性关节炎染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

预期用途

本试剂盒用于检测禽类组织样本中病毒性关节炎病毒RNA，适用于病毒性关节炎感染的辅助诊断。检测结果仅供科研参考，不可用于临床诊断。

产品特点

即开即用，操作简便

特异性引物设计，与相关病毒无交叉反应

检测灵敏度可达几百拷贝/反应

一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染

50次20μL反应体系的检测能力

试剂组成

2×qPCR MagicMix：500μL（棕色管）

荧光PCR专用模板稀释液：1mL（黄盖）

病毒性关节炎病毒PCR引物混合物：100μL（白盖）

病毒性关节炎病毒PCR阳性对照(1×10E8拷贝/μL)：50μL（红盖）

使用手册：1份

储存条件

-20℃避光保存，有效期12个月。运输需低温条件。

适用仪器

ABI7500、安捷伦MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列荧光定量PCR检测仪。

样本采集与处理

采集禽类关节组织或血液样本

组织样本：称取约1g组织，剪碎研磨后加入1.5mL生理盐水，8000rpm离心2min，取上清液100μL

血液样本：待血凝后取血清100μL

使用方法

阳性对照稀释

标记6个离心管，编号7至2

每管加入45μL荧光PCR专用模板稀释液

7号管加入5μL 1×10E8拷贝/μL阳性对照，震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL稀释液

依次稀释至2号管，获得6个10倍稀释梯度(1×10E7至1×10E2拷贝/μL)

反应体系配制

准备N+2个qPCR管(N个待检样品+1个阴性对照+1个阳性对照)

每管加入以下成分：

2×qPCR MagicMix：10μL

引物混合物：2μL

ROX染料(根据仪器要求)：0.4μL

无核酸酶水：6.6μL

模板添加

每管加入2μL模板

加样顺序：阴性对照(DEPC-H2O)、待测样品、阳性对照

离心30秒混匀

扩增程序

预变性：95℃ 3分钟

扩增循环(40个循环)：

95℃ 15秒

60℃ 60秒(采集荧光信号)

熔解曲线分析(可选)

结果分析

阈值设定：取荧光信号对数增长期，通常为3-15个循环

标准曲线绘制：以Ct值为纵坐标，拷贝数对数为横坐标

样品定量：根据标准曲线计算待测样品病毒载量

注意事项

操作需分区进行，避免交叉污染

不同批号试剂不可混用

阳性对照稀释需在独立区域进行

本产品仅限科研使用

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