疏螺旋体（包柔螺旋体）通用染料法荧光定量PCR试剂盒

疏螺旋体（包柔螺旋体）通用染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品特点

高特异性：针对疏螺旋体保守序列设计引物，避免交叉反应。

高灵敏度：检测限可达几百拷贝/反应。

便捷性：即开即用，用户仅需提供DNA模板。

防污染设计：一管式荧光定量PCR，减少后续污染风险。

稳定性：-20℃保存，有效期12个月。

产品用途：科研使用（不可用于临床诊断）

产品规格及成分

| 编号 | 成分 | 规格 | 包装标识 |

| 试剂一 | PCR MagicMix 3.0 | 1 mL | 红盖 |

| 试剂二 | 超纯水 | 1 mL | 亮黄色 |

| 试剂三 | 引物混合液 | 100 μL | 白盖 |

| 试剂四 | 阳性对照（1×10⁸ 拷贝/μL）| 50 μL | 黄盖 |

| — | 使用手册 | 1份 | — |

实验操作流程

1. 阳性对照稀释（示例：10²~10⁷拷贝/μL梯度）

步骤：

标记6管稀释液（编号7~2），每管加45 μL专用模板稀释液。

从原液（10⁸拷贝/μL）开始，逐级稀释至10⁷~10²拷贝/μL，每步换枪头并充分震荡。

稀释后置于冰上备用。

2. PCR反应体系配制

反应体系：20 μL/反应（含MagicMix、引物、模板DNA）。

避光操作，避免气泡，管盖需密封。

3. 荧光定量PCR程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 |

| 变性 | 95℃ | 15 sec | 40 |

| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | |

| 信号采集 | 530 nm | — | |

4. 数据分析

定量检测：以阳性对照log值为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，推算样本浓度。

定性检测：

阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30。

样本Ct≤35为阳性，≥40为阴性；35~40需复测。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、加样需在不同区域进行，避免交叉污染。

防护措施：使用一次性耗材（吸头、手套），实验后以10%次氯酸或75%酒精消毒台面。

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

废弃物处理：所有组分按生物污染废弃物规范处置。

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