停乳链球菌染料法荧光定量PCR试剂盒

检验原理

本试剂盒采用SYBR Green染料法实时荧光定量PCR技术，针对停乳链球菌（Streptococcus agalactiae）的基因高度保守区域设计特异性引物，通过荧光信号实时监测核酸扩增过程，实现定性及定量检测。

产品特点

高灵敏度：优化的引物设计，可检测低拷贝数目标基因。

高特异性：引物针对停乳链球菌特有序列，避免交叉反应。

即开即用：用户仅需提供待测DNA模板，操作简便。

双重检测模式：支持定性和定量分析，定量线性范围达5个数量级。

内置对照：提供阳性对照，便于排除假阴性干扰。

操作流程

样本准备

临床样本（如血液、分泌物、组织等）：

血液样本：采集2 mL静脉血，EDTA抗凝，混匀后提取DNA。

病灶样本：无菌采集渗出物或脓液，提取核酸。

食品/环境样本：按微生物检测标准预处理后提取DNA。

试剂配制

解冻与混匀：

从-20℃取出试剂，冰上解冻5-10分钟。

轻缓颠倒混匀，避免气泡，短暂离心（1000 rpm，10秒）。

反应体系配置（20 μL/反应）：

预混液10 μL + 引物2 μL + 模板DNA 2 μL + RNase-free水6 μL。

建议设置3次技术重复及阴性对照（NTC）。

PCR扩增程序

预变性：95℃ 5分钟。

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（荧光采集）。

熔解曲线分析：60℃~95℃，0.5℃/步，验证扩增特异性。

结果判读

定性检测：Ct值≤35且熔解曲线单一峰判为阳性。

定量检测：通过标准曲线计算模板拷贝数。

注意事项

实验分区操作，避免气溶胶污染。

阳性对照需独立稀释，防止污染其他组分。

熔解曲线异常可能提示非特异性扩增，需复核引物设计或样本纯度。

储存与有效期

-20℃避光保存，有效期12个月。

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