嗜热链球菌染料法荧光定量PCR试剂盒

检验原理

本试剂盒采用SYBR Green染料法实时荧光定量PCR技术，针对嗜热链球菌基因组高度保守区域设计特异性引物，通过荧光信号实时监测核酸扩增过程，实现定性及定量检测。扩增过程中，荧光信号强度与PCR产物量成正比，通过标准曲线计算目标基因拷贝数。

产品特点

高灵敏度：可检测低至10^2拷贝/μL的靶标核酸。

特异性强：引物经优化设计，不与相近菌种核酸交叉反应。

即开即用：预混反应体系（含酶、dNTPs、缓冲液等），用户仅需提供DNA模板。

质量控制：提供阳性对照（非活体DNA片段）和阴性对照，避免假阴性/假阳性干扰。

兼容性：适配主流荧光定量PCR仪（如ABI 7500、Bio-Rad CFX等）。

操作步骤

1. 样本准备

食品/环境样本：按微生物学标准预处理（如均质、增菌）。

DNA提取：采用柱式或磁珠法提取核酸，建议OD260/280比值1.8-2.0。

2. 试剂配制

解冻预混液（冰上操作），轻柔混匀后瞬时离心，避免气泡。

反应体系（20 μL/孔）：

预混液 10 μL

引物混合液 2 μL

模板DNA 2 μL

RNase-free水 6 μL

3. PCR程序设置

预变性：95℃ 5 min

循环阶段（40 cycles）：95℃ 10 s → 60℃ 30 s（荧光采集）

熔解曲线分析：60℃至95℃，每0.5℃递增5 s

4. 数据分析

阈值循环数（Ct值）≤35判为阳性；

定量分析需使用标准品绘制标准曲线（10^2-10^7拷贝/μL梯度稀释）。

注意事项

分区操作：模板添加与PCR产物分析需在不同区域进行，避免污染。

重复设置：建议技术重复≥3次，确保数据可靠性。

阴性对照：必须包含无模板对照（NTC）以排除试剂污染。

储存与运输

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（解冻后建议分装）。

运输条件：冰袋或干冰运输。

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