乳房链球菌染料法荧光定量PCR试剂盒

产品概述

本试剂盒专为乳房链球菌（Streptococcus uberis）的快速、高灵敏度检测设计，采用染料法荧光定量PCR技术，适用于科研领域的定性和定量分析。

产品特点

高特异性：基于乳房链球菌保守序列设计的引物，避免交叉反应。

灵敏度高：检测限可达几百拷贝/反应。

操作简便：即开即用，兼容常规核酸提取方法。

稳定性强：-20℃保存，有效期12个月。

适用范围：50次20μL体系的荧光定量PCR反应。

试剂盒组成

预混PCR反应液（含染料）

阳性对照（1×10^8拷贝/μL）

DEPC-H2O（无核酸酶水）

使用说明书

实验步骤

1. DNA提取（样本制备区）

使用自选方法或兼容的核酸提取试剂盒纯化样本DNA。

2. 标准曲线制备（样本制备区）

标记6支离心管（7至2号），每管加入45 μL DEPC-H2O。

在7号管中加入5 μL阳性对照（1×10^8拷贝/μL），震荡混匀，得到1×10^7拷贝/μL的标准品。

依次梯度稀释至1×10^2拷贝/μL（6至2号管），每步更换枪头。

3. PCR反应（扩增区）

反应体系：20 μL（含DNA模板、预混液、ROX参比染料）。

扩增程序：

预变性：95℃ 5分钟；

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒，60℃ 30秒（荧光采集）。

数据分析

定量检测：以阳性对照log值为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性检测：

阴性对照Ct≥40；阳性对照Ct≤30且呈典型扩增曲线。

样本Ct≤35为阳性，≥40为阴性；35<Ct<40需重复检测。

注意事项

分区操作避免污染，尤其是标准品稀释需在独立区域进行。

试剂保存于-20℃，避免反复冻融。

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