海豚链球菌染料法荧光定量PCR试剂盒

检验原理

本试剂盒采用SYBR Green染料法实时荧光定量PCR技术，针对海豚链球菌（Streptococcus iniae）基因组高度保守区域设计特异性引物，通过荧光信号检测实现对靶标核酸的定性及定量分析。在反应体系中，若存在海豚链球菌核酸模板，PCR扩增将释放荧光信号，仪器实时监测信号强度并输出结果。

产品特点

高灵敏度：优化引物设计，检测限低至10拷贝/μL。

高特异性：引物经严格验证，不与相近菌种（如无乳链球菌、A组链球菌等）发生交叉反应。

即开即用：预混反应体系（含酶、dNTPs、缓冲液等），用户仅需提供DNA模板。

双重质控：提供阳性对照（标准品DNA片段）和阴性对照（无模板对照，NTC），确保结果可靠性。

宽动态范围：定量检测线性范围覆盖10^2–10^7拷贝/μL。

操作流程

样本准备

样本类型：

鱼类组织（肌肉、肝脏等）：无菌采集后匀浆，提取DNA。

水体样本：过滤浓缩后提取核酸。

DNA提取：推荐使用柱式法或磁珠法核酸提取试剂盒，确保纯度（A260/A280比值1.8–2.0）。

试剂配制

解冻与混匀：

从-20℃取出预混液，冰上解冻后轻柔颠倒混匀，避免气泡。

短暂离心（1000 rpm，10秒）收集管壁液体。

反应体系配置（20 μL/反应）：

预混液：10 μL

引物混合液：2 μL

DNA模板：2 μL（建议浓度5–100 ng/μL）

RNase-free水：补至20 μL

PCR程序设置

预变性：95℃ 5分钟

循环阶段（40 cycles）：

变性：95℃ 15秒

退火/延伸：60℃ 30秒（荧光采集）

熔解曲线分析：60–95℃，每0.5℃递增，持续5秒/step。

数据分析

定性检测：Ct值≤35且熔解曲线为单一峰判为阳性。

定量检测：以标准品（10^2–10^7拷贝/μL）建立标准曲线，计算样本拷贝数。

注意事项

实验分区操作，避免气溶胶污染。

阳性对照与样本需在不同区域处理，防止交叉污染。

熔解曲线异常（多峰）可能提示引物二聚体或非特异性扩增，需优化条件。

储存与有效期

-20℃避光保存，有效期12个月。

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