变异链球菌染料法荧光定量PCR试剂盒

检验原理

本试剂盒基于SYBR Green染料法实时荧光定量PCR技术，针对变异链球菌（Streptococcus mutans）基因组高度保守区域设计特异性引物。通过荧光信号实时监测核酸扩增过程，实现对靶标DNA的定性和定量检测。

产品特点

高灵敏度：优化的引物设计可检测低至10^2拷贝/μL的靶标核酸。

特异性强：引物经严格验证，不与相近菌种或宿主DNA发生交叉反应。

即开即用：预混反应体系包含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料，用户仅需提供模板DNA。

双重质控：提供阳性对照（标准品DNA片段）和阴性对照（无模板对照，NTC），确保结果可靠性。

宽动态范围：定量线性范围覆盖10^2–10^7拷贝/μL，适用于绝对定量分析。

操作流程

样本处理

口腔样本：采集龈缘菌斑或唾液，使用DNA提取试剂盒分离核酸。

其他样本：血液、组织等需按标准方法提取DNA，建议OD260/280比值1.8–2.0。

试剂准备

解冻预混液于冰上，轻柔混匀后瞬时离心，避免气泡。

按需稀释阳性对照（10倍梯度稀释，建议6个浓度点）。

反应体系配置（20 μL/孔）

| 组分 | 体积（μL） |

| 2× SYBR Premix | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板DNA | 2 |

| RNase-free H₂O | 6 |

PCR程序设置

预变性：95℃ 3分钟

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）

熔解曲线分析：60–95℃，每0.5℃递增

注意事项

实验分区操作：模板添加与扩增需在不同区域进行，避免污染。

技术重复：建议每组样本设3个复孔，提高数据可靠性。

熔解曲线验证：单一峰值表明扩增特异性，多峰需排除引物二聚体或污染。

储存与有效期

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

有效期：12个月。

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