口腔链球菌染料法荧光定量PCR试剂盒

检验原理

本试剂盒基于SYBR Green染料法实时荧光定量PCR技术，针对口腔链球菌（Streptococcus oralis）基因组高度保守区域设计特异性引物，通过体外扩增靶标核酸并监测荧光信号强度，实现定性或定量检测。

产品特点

高灵敏度：优化引物设计，检测限低至10拷贝/μL。

高特异性：引物经严格验证，不与相近菌种核酸发生交叉反应。

即开即用：预混反应体系（含酶、dNTPs、缓冲液等），用户仅需提供DNA模板。

双功能检测：支持绝对定量（标准曲线法）和相对定量（内参基因校正）。

质量控制：提供阳性对照（非活体DNA片段）和阴性对照，避免假阴性/假阳性干扰。

操作流程

样本处理

口腔拭子：无菌拭子采集样本后，置于1 mL生理盐水中震荡洗脱，离心取沉淀提取DNA。

DNA提取：建议使用柱式法或磁珠法提取核酸，OD260/280比值应介于1.8-2.0。

试剂准备

解冻预混液后冰上静置5分钟，轻柔颠倒混匀，避免气泡。

阳性对照梯度稀释（10^2-10^7拷贝/μL），每稀释一步更换枪头。

反应体系配置（20 μL/孔）

| 组分 | 体积（μL） |

| 2× qPCR Master Mix | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板DNA | 2 |

| RNase-free水 | 6 |

PCR程序

预变性：95℃ 3分钟；

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）；

熔解曲线分析：60℃至95℃，每0.5℃递增。

注意事项

防污染：实验分区操作（试剂配制区、样本处理区、扩增区），使用带滤芯枪头。

重复性：建议每样本设3次技术重复，内参基因推荐GAPDH或16S rRNA。

数据判读：Ct值≤35且熔解曲线为单一峰视为阳性。

储存与运输

保存条件：-20℃避光，有效期12个月；

运输方式：冰袋低温运输。

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