回归热疏螺旋体（回归热包柔螺旋体）染料法荧光定量PCR试剂盒

回归热疏螺旋体（回归热包柔螺旋体）染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

性能特点

即开即用：用户仅需提供DNA模板，操作便捷。

高特异性：引物基于回归热疏螺旋体保守区设计，避免交叉反应。

高灵敏度：荧光定量PCR技术检测限低，优于常规PCR。

闭管操作：一管式设计减少污染风险。

双重功能：支持定性与定量检测，定量线性范围达5个数量级。

试剂盒组成

| 成分 | 规格/包装 | 备注 |

| 2×qPCR Magic Mix | 500 μL（棕色管） | 含荧光染料与聚合酶 |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL（黄盖） | 用于标准品稀释 |

| qPCR引物混合液 | 100 μL（白盖） | 特异性引物与探针 |

| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50 μL（黄盖） | 非活体DNA片段 |

| 说明书 | 1份 | 含操作流程与参数设置 |

操作步骤

1. 阳性对照稀释（示例：10^2~10^7拷贝/μL）

在独立区域进行，避免污染。

取6管，分别加入45 μL稀释液，梯度稀释阳性对照（5 μL原液+45 μL稀释液，依次10倍稀释）。

2. PCR反应体系（20 μL/反应）

| 组分 | 体积（μL） |

| 2×qPCR Magic Mix | 10 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板DNA | 2 |

| 超纯水 | 6 |

3. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 94℃ | 5 min | 1 |

| 变性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |

| 退火 | 50-65℃ | 20 sec | |

| 延伸 | 72℃ | 30 sec/kb| |

| 终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |

注：退火温度需根据引物Tm值调整（建议低于理论值2-5℃）。

常见问题与解决

无扩增条带：检查试剂活性（避免反复冻融）、优化退火温度或重新设计引物。

弱扩增信号：确保模板质量，避免稀释液过量。

假阳性：操作时分区进行，避免交叉污染。

注意事项

试剂需避光保存，避免反复冻融。

阳性对照为DNA片段，不可用于活体实验。

具体参数可能因仪器型号调整，建议预实验优化条件。

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