河流弧菌染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

河流弧菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于染料法荧光定量PCR技术，专用于快速、高灵敏度检测河流弧菌（Vibrio fluvialis）的核酸。适用于科研领域，如环境样本、临床标本或食品微生物检测中的河流弧菌筛查。

产品组成

预混液：含Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料（如SYBR Green）

引物对：特异性扩增河流弧菌靶基因序列

阳性对照：河流弧菌标准DNA模板

阴性对照：无核酸酶水

使用说明书

技术参数

检测靶标：河流弧菌特异性基因（如16S rRNA或毒力基因）

灵敏度：可检测低至10拷贝/μL的核酸

特异性：与近源弧菌（如霍乱弧菌、副溶血弧菌）无交叉反应

反应体系：50 μL/反应（推荐）

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月

实验步骤

1. 样本处理

DNA提取：使用商用DNA提取试剂盒或酚-氯仿法从样本（如粪便、水体）中提取核酸。

模板稀释：建议将DNA稀释至1–100 ng/μL，避免PCR抑制物干扰。

2. PCR反应体系配置

在冰上按以下比例配制反应混合液（以单次反应为例）：

| 组分 | 体积（μL） |

| 预混液（2×） | 25 |

| 正向引物（10 μM） | 1 |

| 反向引物（10 μM） | 1 |

| DNA模板 | 2–5 |

| 无核酸酶水 | 补足至50 |

注意事项：

避免反复冻融试剂，解冻后需涡旋混匀并短暂离心。

每批次实验需设置阴性对照（无模板）和阳性对照。

3. PCR扩增程序

按以下参数设置荧光定量PCR仪：

预变性：95℃, 5 min

循环阶段（40个循环）：

变性：95℃, 30 sec

退火：58℃, 30 sec（温度需根据引物Tm值优化）

延伸：72℃, 30 sec

熔解曲线分析：72℃→95℃，每0.5℃采集荧光信号，验证扩增特异性。

数据分析

阈值设定：仪器软件自动或手动设定荧光信号阈值。

Ct值解读：Ct值≤35视为阳性，>35需结合熔解曲线判断（非特异性扩增需排除）。

质量控制

阴性对照：应无扩增曲线（Ct值=Undetected）。

阳性对照：Ct值需在预期范围内（如15–25）。

注意事项

实验需在无菌环境下操作，避免气溶胶污染。

试剂解冻后应置于冰上，使用后立即放回-20℃。

本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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