流行性出血热病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

产品概述

本试剂盒基于SYBR Green I染料法，专为流行性出血热病毒（如汉坦病毒等）的RNA检测设计，通过一步法荧光定量RT-PCR技术实现高灵敏度、高特异性的核酸定量分析。适用于临床样本、环境监测及科研领域的病毒载量检测。

检测原理

反转录与扩增一体化：试剂盒采用耐热逆转录酶（如Hifair® V Reverse Transcriptase）和热启动Taq DNA聚合酶（如UNICON® HotStart Taq），在单管内完成cDNA合成与qPCR扩增，减少操作步骤和污染风险。

荧光信号采集：SYBR Green I染料与双链DNA结合后发射荧光，通过实时监测荧光强度实现靶标定量。

产品组分

2× Advanced SG Buffer：含优化缓冲体系、dNTPs及Mg²⁺。

UH Enzyme Mix：逆转录酶与热启动Taq聚合酶预混液。

RNase-free H₂O：无核酸酶水。

阳性对照：非传染性病毒核酸片段（1×10⁸拷贝/μL）。

技术参数

灵敏度：可检测低至0.1 pg病毒RNA（高表达靶标）或单拷贝DNA。

线性范围：覆盖10²–10⁷拷贝/μL（5个数量级）。

特异性：针对病毒高度保守区设计引物，避免交叉反应。

稳定性：预混液在4℃下可保存24小时。

操作步骤

标准曲线制备：

将阳性对照按10倍梯度稀释（10²–10⁷拷贝/μL），独立操作以避免污染。

反应体系配制（20 μL/反应）：

10 μL 2× SG Buffer

0.5 μL UH Enzyme Mix

1 μL模板RNA

8.5 μL RNase-free H₂O

PCR程序：

逆转录：50℃ 15分钟

预变性：95℃ 5分钟

扩增：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（40循环）

熔解曲线分析：60–95℃（验证扩增特异性）。

注意事项

防污染：使用带滤芯枪头，分区操作。

适用性：兼容常见qPCR仪器（No/Low/High Rox平台）。

应用限制：仅限科研或专业检测使用。

质量控制

每批试剂盒经灵敏度、重复性（CV<5%）及特异性验证。

阳性对照需产生预期Ct值，阴性对照无扩增。

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