轮状病毒E群染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

产品基本信息

规格：50次/盒（20μL反应体系）

保存条件：-20℃避光保存

有效期：24个月

用途：科研用途，适用于轮状病毒E群RNA的定性及定量检测。

性能参数

检测方法：染料法荧光定量RT-PCR（SYBR Green I）。

检测类型：

定性：判定样本中轮状病毒E群RNA的存在。

定量：线性范围≥5个数量级（需配合标准品）。

灵敏度：最低检测限≤100拷贝/μL。

特异性：与其他常见轮状病毒亚型（如A群、B群）无交叉反应。

试剂盒组成

RT-PCR预混液：含逆转录酶、热启动DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等。

荧光染料：SYBR Green I（避光保存）。

阳性对照：轮状病毒E群RNA片段（1×10^6拷贝/μL）。

阴性对照：无RNA酶水。

说明书（即本文件）。

实验操作指南

样本准备：

提取待测样本RNA（建议使用商业RNA提取试剂盒）。

对照设置：

阳性对照（PC）：试剂盒提供的阳性对照稀释至与样本体积一致。

阴性对照（NC）：无RNA酶水。

每批实验需设N+2个反应（N=样本数，额外增加PC和NC）。

PCR反应体系（20μL/反应）：

| 组分 | 体积（μL） |

| RT-PCR预混液 | 10 |

| 荧光染料 | 0.5 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板RNA | 2 |

| 无RNA酶水 | 补至20 |

扩增程序：

逆转录：50℃ 15分钟。

预变性：95℃ 2分钟。

循环（40次）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）。

结果分析：

定性：Ct值≤35且溶解曲线为单一峰判为阳性。

定量：通过标准曲线计算拷贝数。

质控要求：

NC无扩增曲线，PC Ct值在预期范围内，否则实验无效。

注意事项

污染控制：

实验分区操作（样本制备区、PCR扩增区）。

阴性对照出现扩增时，需排查污染源并重复实验。

储存与运输：

避免反复冻融，开封后尽快使用。

适用范围：仅限科研，不可用于临床诊断。

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