卵形疟原虫核酸检测试剂盒 新品

产品介绍：

卵形疟原虫核酸检测试剂盒是一种用于体外定性检测人源样本中卵形疟原虫（Plasmodium ovale）核酸的分子诊断工具。

虽然疟疾诊断常依赖显微镜镜检或快速抗原检测，但核酸检测凭借其极高的灵敏度和特异性，成为区分卵形疟原虫与其他疟原虫（特别是与恶性疟、间日疟区分）的“金标准”，尤其适用于低密度感染和混合感染的诊断。

以下是关于该试剂盒的详细介绍：

1. 检测原理与技术

该试剂盒主要基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，通常采用TaqMan探针法。

核心机制：

DNA提取：从全血或滤纸干血斑中提取疟原虫的基因组DNA。

荧光PCR扩增：针对卵形疟原虫基因组中高度保守的区域设计特异性引物和探针。

常见靶标：18S rRNA基因（核糖体RNA基因），这是区分疟原虫种属最常用的靶标。

特异性设计：引物和探针专门针对P. ovale设计，通常不会与恶性疟、间日疟、三日疟原虫发生交叉反应。

内标质控：通常包含人源内标（如RNase P基因），用于监控样本质量和排除假阴性。

2. 试剂盒特点与性能

这类试剂盒专为寄生虫检测设计，具有以下显著特点：

性能维度  描述

特异性  极高。能够特异性识别卵形疟原虫，区分于其他四种常见的人体疟原虫（恶性疟、间日疟、三日疟、诺氏疟）。

灵敏度  极高。最低检测限通常可达 10～100 copies/mL，甚至能检测出显微镜无法观察到的低密度感染。

检测速度  快速。整个检测流程（含DNA提取）通常在 2-3 小时 内完成。

分型能力  部分高端试剂盒可进一步区分卵形疟原虫壁虎亚种（P. ovale wallikeri）和经典亚种（P. ovale curtisi）。

3. 适用样本与应用场景

适用样本：

全血（EDTA抗凝）：最常用的临床样本。

滤纸干血斑（DBS）：适用于野外现场调查和样本运输。

应用场景：

临床确诊：用于疑似疟疾病例的确诊，特别是对于镜检阴性但临床症状符合的患者。

流行病学调查：用于疟疾流行区的虫种分布调查和消除疟疾后的监测。

输血安全：筛查献血者是否携带低密度疟原虫。

4. 优势与临床意义

克服传统方法局限：显微镜镜检对操作者经验要求高，且在低寄生虫密度时容易漏诊；抗原快速检测试纸条（RDT）对卵形疟的敏感性可能不足。PCR检测弥补了这些不足。

混合感染检测：能够发现单一感染还是混合感染（如卵形疟+恶性疟混合感染），这对临床治疗方案的选择至关重要。

耐药基因检测基础：核酸提取物还可用于后续的抗疟药耐药基因（如Pfmdr1, dhps等）分析。

5. 操作注意事项

样本采集：发热期采集的血液样本阳性率较高。

防污染：PCR检测极其灵敏，必须严格分区操作，防止扩增产物污染导致假阳性。

结果解读：核酸检测结果需结合患者的流行病学史（如是否去过非洲、东南亚疫区）和临床症状综合判断。

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操作步骤：

整个流程遵循“‌样本处理 → 试剂配制 → 加样 → 上机检测 → 结果分析‌”的逻辑，核心是‌防污染‌和‌精准操作‌。

‌1. 样本处理 (核酸提取)‌

‌样本‌：鼻咽拭子、咽拭子或痰液样本。

‌裂解‌：将拭子浸入裂解液，充分混匀后室温静置10分钟。

‌提取‌：采用‌磁珠法或离心柱法‌提取总RNA，严格按照试剂盒说明书操作。

‌保存‌：洗脱后的RNA应立即使用或分装保存于‌-80℃‌。

‌2. 试剂配制与加样‌

‌反应体系准备‌：在‌试剂准备区‌配制Master Mix。根据待检测样本数计算总体积，通常按‌样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照‌的原则来配制。

‌推荐体系‌：例如，使用‌20μL‌体系的试剂盒，可包含‌qPCR预混液16μL‌、‌引物探针混合液4μL‌（具体体积请以实际说明书为准）。

‌分装‌：将配好的反应体系分装至PCR反应管中（如‌20μL/管‌）。

‌加样‌：在‌样本处理区‌，分别向反应管中加入‌5μL‌的模板RNA（样本、阳性质控、阴性质控）。‌盖紧管盖，短暂离心‌，避免污染和气泡。

‌3. 上机检测‌
‌运行程序‌：将反应管放入荧光定量PCR仪，运行预设程序。典型程序包括：

‌逆转录‌：50℃，15分钟（将RNA逆转录为cDNA）。

‌预变性‌：95℃，10分钟（激活Hot-Start Taq酶）。

‌扩增循环‌：通常为40个循环，每个循环包括‌变性（95℃，15秒）‌ 和 ‌退火/延伸（60℃，45秒）‌，仪器在退火/延伸步骤同时采集荧光信号。

‌信号监测‌：仪器实时监测荧光信号变化，生成扩增曲线。

‌4. 结果分析与判定‌

‌Ct值‌：仪器根据荧光曲线自动计算阈值循环数（Ct值）。

‌结果判定‌：

‌阳性‌：样本Ct值 ‌≤ 37‌（具体阈值请以试剂盒说明书为准），且扩增曲线呈典型"S"型。

‌阴性‌：样本无Ct值或Ct值 ‌> 40‌。

‌无效‌：阳性对照无Ct值或Ct值 ‌> 35‌，或阴性对照有Ct值，需‌重新检测‌。