森林脑炎病毒(蜱传脑炎病毒)核酸检测试剂盒 新品

产品介绍：

森林脑炎病毒（Tick-borne Encephalitis Virus, TBEV），又称蜱传脑炎病毒，属于黄病毒科，是引起中枢神经系统感染（脑炎、脑膜炎）的主要病原体之一，主要通过蜱虫叮咬传播。

1. 检测原理

目前市面上的试剂盒主要基于实时荧光定量RT-PCR技术（Real-time RT-PCR）。

靶标区域： 针对森林脑炎病毒基因组的高度保守区域设计特异性引物和探针，通常位于包膜蛋白（E蛋白）基因或5'非编码区（5'UTR）。

技术原理： 采用一步法RT-PCR。首先将样本中的病毒RNA逆转录为cDNA，然后进行PCR扩增。

荧光检测： 通常使用TaqMan探针法，标记FAM荧光基团。若样本中存在森林脑炎病毒RNA，扩增过程中会释放荧光信号，仪器通过监测Ct值来判断结果。

分型检测： 森林脑炎病毒主要分为远东亚型（TBEV-Sib）和欧洲亚型（TBEV-Eur）。部分试剂盒采用双重荧光PCR技术，可同时检测并区分这两个亚型（例如：FAM通道检测远东亚型，VIC/HEX通道检测欧洲亚型）。

2. 产品特点

高特异性： 专门针对TBEV设计，通常不会与乙型脑炎病毒（Japanese Encephalitis Virus）、登革病毒（Dengue Virus）等其他黄病毒属成员发生交叉反应（黄病毒属间存在一定的血清学交叉反应，但核酸检测具有高度特异性）。

高灵敏度： 最低检测限通常可达 10³ copies/mL 或 500 拷贝/毫升，能够检测到极低浓度的病毒，有助于早期诊断。

快速高效： 检测时间通常在 2小时 左右，远快于病毒分离培养法（需数天至一周）。

3. 主要用途

临床辅助诊断： 用于检测人血清、脑脊液或全血样本，辅助诊断由森林脑炎病毒感染引起的病毒性脑炎、脑膜炎。

流行病学监测： 用于监测森林脑炎的流行趋势和疫区分布。

媒介监测： 用于检测蜱虫等媒介生物中的病毒携带情况。

4.  储存与使用注意事项

储存条件： 试剂盒通常需要 -20℃ 避光保存（部分组分如酶液对温度敏感），避免反复冻融，有效期通常为12个月。

样本类型： 常用样本包括急性期血清和脑脊液。发病初期（病毒血症期）检出率较高。

操作规范： 需在具备PCR检测资质的实验室进行，严格分区操作，防止气溶胶污染。

结果判读：

阳性： FAM通道扩增曲线呈典型“S”型，且Ct值小于设定的阈值（通常在35-40之间）。

阴性： 无扩增曲线，或Ct值大于阈值。

无效： 阳性对照未扩增或阴性对照出现扩增，提示实验失败，需重做。

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操作步骤：

整个流程遵循“‌样本处理 → 试剂配制 → 加样 → 上机检测 → 结果分析‌”的逻辑，核心是‌防污染‌和‌精准操作‌。

‌1. 样本处理 (核酸提取)‌

‌样本‌：鼻咽拭子、咽拭子或痰液样本。

‌裂解‌：将拭子浸入裂解液，充分混匀后室温静置10分钟。

‌提取‌：采用‌磁珠法或离心柱法‌提取总RNA，严格按照试剂盒说明书操作。

‌保存‌：洗脱后的RNA应立即使用或分装保存于‌-80℃‌。

‌2. 试剂配制与加样‌

‌反应体系准备‌：在‌试剂准备区‌配制Master Mix。根据待检测样本数计算总体积，通常按‌样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照‌的原则来配制。

‌推荐体系‌：例如，使用‌20μL‌体系的试剂盒，可包含‌qPCR预混液16μL‌、‌引物探针混合液4μL‌（具体体积请以实际说明书为准）。

‌分装‌：将配好的反应体系分装至PCR反应管中（如‌20μL/管‌）。

‌加样‌：在‌样本处理区‌，分别向反应管中加入‌5μL‌的模板RNA（样本、阳性质控、阴性质控）。‌盖紧管盖，短暂离心‌，避免污染和气泡。

‌3. 上机检测‌
‌运行程序‌：将反应管放入荧光定量PCR仪，运行预设程序。典型程序包括：

‌逆转录‌：50℃，15分钟（将RNA逆转录为cDNA）。

‌预变性‌：95℃，10分钟（激活Hot-Start Taq酶）。

‌扩增循环‌：通常为40个循环，每个循环包括‌变性（95℃，15秒）‌ 和 ‌退火/延伸（60℃，45秒）‌，仪器在退火/延伸步骤同时采集荧光信号。

‌信号监测‌：仪器实时监测荧光信号变化，生成扩增曲线。

‌4. 结果分析与判定‌

‌Ct值‌：仪器根据荧光曲线自动计算阈值循环数（Ct值）。

‌结果判定‌：

‌阳性‌：样本Ct值 ‌≤ 37‌（具体阈值请以试剂盒说明书为准），且扩增曲线呈典型"S"型。

‌阴性‌：样本无Ct值或Ct值 ‌> 40‌。

‌无效‌：阳性对照无Ct值或Ct值 ‌> 35‌，或阴性对照有Ct值，需‌重新检测‌。