耶尔森菌核酸检测试剂盒

产品介绍：

耶尔森菌（Yersinia）核酸检测试剂盒是一种用于体外定性检测耶尔森菌核酸的分子诊断工具。耶尔森菌属中与人类疾病关系最密切的主要包括小肠结肠炎耶尔森菌（Y. enterocolitica）和假结核耶尔森菌（Y. pseudotuberculosis），前者是引起肠道感染的主要病原体，后者症状类似阑尾炎。

�� 试剂盒核心原理

该试剂盒主要基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，通常采用TaqMan荧光探针法。

样本处理：从粪便、肛拭子、血液或食品样本中提取细菌DNA。

特异性扩增：

种特异性检测：针对耶尔森菌的保守基因（如16S rRNA、ail基因、foxA基因）设计引物和探针。

毒力/分型检测（部分高端试剂盒）：可同时检测ystA（耐热肠毒素）、yadA（粘附素）、virF（转录活化因子）等基因，用于区分致病性菌株和非致病性菌株。

区分假结核耶尔森菌：部分试剂盒会同时检测inv基因（侵袭素基因），以区分小肠结肠炎耶尔森菌和假结核耶尔森菌。

荧光检测：在PCR扩增过程中，随着目标序列的扩增，荧光信号同步释放，仪器根据Ct值判定结果。

�� 典型产品参数

参数项  典型指标/说明

通用名称  耶尔森菌核酸检测试剂盒（荧光PCR法）

检测靶标  ail、foxA（小肠结肠炎耶尔森菌）；inv（假结核耶尔森菌）

检测样本  粪便、肛拭子、血液、食品（肉类、乳制品）、环境水样

灵敏度  最低检测限通常可达 1×10³ CFU/mL 或 10² - 10³ 拷贝/μL

特异性  仅特异性扩增耶尔森菌，与沙门氏菌、志贺氏菌、大肠杆菌等无交叉反应

储存条件  -20℃ 避光保存，有效期通常为12个月

组成成分

PCR反应液：含dNTPs、Mg²⁺、缓冲液、特异性引物和探针。

酶混合物：热启动Taq DNA聚合酶。

阳性对照：含有目的基因片段的质粒或灭活菌液。

阴性对照：无核酸酶水。

内标（部分试剂盒）：用于监控提取效率和扩增抑制。

�� 结果判读标准

阳性（+）：

FAM通道（或其他检测通道）出现典型的S型扩增曲线。

Ct值 ≤ 35-38（视具体说明书而定）。

结论：样本中检出耶尔森菌核酸。

阴性（-）：

无扩增曲线，或Ct值 > 38-40。

结论：样本中未检出耶尔森菌核酸。

无效：

阳性对照未扩增，或阴性对照出现扩增，提示实验失败或存在污染，需重做。

⚠️ 注意事项与临床意义

临床意义：小肠结肠炎耶尔森菌感染常表现为发热、腹痛（右下腹痛易误诊为阑尾炎）、腹泻等症状。快速检测有助于鉴别诊断，避免误诊误治。

毒力分型：携带ail、ystA、yadA等基因的菌株通常具有更强的致病力。试剂盒若能检测这些基因，对评估病情严重程度有参考价值。

样本采集：应在使用抗生素前采集粪便或血液样本。对于食品检测，建议使用增菌液进行前增菌以提高检出率。

生物安全：耶尔森菌属于潜在的致病菌，操作时应在BSL-2实验室中进行，并做好个人防护。

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操作步骤：

整个流程遵循“‌样本处理 → 试剂配制 → 加样 → 上机检测 → 结果分析‌”的逻辑，核心是‌防污染‌和‌精准操作‌。

‌1. 样本处理 (核酸提取)‌

‌样本‌：鼻咽拭子、咽拭子或痰液样本。

‌裂解‌：将拭子浸入裂解液，充分混匀后室温静置10分钟。

‌提取‌：采用‌磁珠法或离心柱法‌提取总RNA，严格按照试剂盒说明书操作。

‌保存‌：洗脱后的RNA应立即使用或分装保存于‌-80℃‌。

‌2. 试剂配制与加样‌

‌反应体系准备‌：在‌试剂准备区‌配制Master Mix。根据待检测样本数计算总体积，通常按‌样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照‌的原则来配制。

‌推荐体系‌：例如，使用‌20μL‌体系的试剂盒，可包含‌qPCR预混液16μL‌、‌引物探针混合液4μL‌（具体体积请以实际说明书为准）。

‌分装‌：将配好的反应体系分装至PCR反应管中（如‌20μL/管‌）。

‌加样‌：在‌样本处理区‌，分别向反应管中加入‌5μL‌的模板RNA（样本、阳性质控、阴性质控）。‌盖紧管盖，短暂离心‌，避免污染和气泡。

‌3. 上机检测‌
‌运行程序‌：将反应管放入荧光定量PCR仪，运行预设程序。典型程序包括：

‌逆转录‌：50℃，15分钟（将RNA逆转录为cDNA）。

‌预变性‌：95℃，10分钟（激活Hot-Start Taq酶）。

‌扩增循环‌：通常为40个循环，每个循环包括‌变性（95℃，15秒）‌ 和 ‌退火/延伸（60℃，45秒）‌，仪器在退火/延伸步骤同时采集荧光信号。

‌信号监测‌：仪器实时监测荧光信号变化，生成扩增曲线。

‌4. 结果分析与判定‌

‌Ct值‌：仪器根据荧光曲线自动计算阈值循环数（Ct值）。

‌结果判定‌：

‌阳性‌：样本Ct值 ‌≤ 37‌（具体阈值请以试剂盒说明书为准），且扩增曲线呈典型"S"型。

‌阴性‌：样本无Ct值或Ct值 ‌> 40‌。

‌无效‌：阳性对照无Ct值或Ct值 ‌> 35‌，或阴性对照有Ct值，需‌重新检测‌。