空肠弯曲菌核酸检测试剂盒 新品

 产品介绍：

空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni, CJ）核酸检测试剂盒是一种用于体外定性检测样本中空肠弯曲菌核酸的分子诊断工具。该试剂盒主要基于实时荧光PCR（qPCR）或恒温荧光法技术，广泛应用于食品安全监测（如鸡肉、生菜）、临床粪便样本检测及环境微生物调查。

检测原理

目前市面上的试剂盒主要采用以下两种技术：

实时荧光PCR法（TaqMan探针法）：

靶标基因： 针对空肠弯曲菌基因组的保守区域设计，最常用的是 hipO 基因（热休克蛋白基因，具有高度特异性）或 mapA 基因（膜抗原蛋白基因）。

原理： 利用特异性引物和荧光标记的探针（通常为FAM荧光素），在PCR扩增过程中，若样本中含有空肠弯曲菌，探针被水解并释放荧光信号，仪器实时监测并判读结果。

恒温荧光法（如LAMP）：

原理： 针对靶基因的6个特定区域设计多组引物，在恒温条件下（通常60-65℃）进行扩增。

特点： 反应速度快（约60分钟），肉眼可见颜色变化（如由橙色变绿色），无需复杂仪器，适合现场快速筛查。

�� 典型性能参数

参数指标  典型数值/范围  说明

检测目标  hipO 基因 / mapA 基因  确保检测的是空肠弯曲菌

检测方法  荧光PCR法 / 恒温荧光法  探针法为主流

检测限  10³ CFU/mL 或 1-10 CFU/mL  灵敏度高，优于传统培养法

特异性  强  不与结肠弯曲菌、大肠杆菌等交叉反应

检测时间  60 ～ 90 分钟 (荧光PCR)

～ 60 分钟 (恒温法)  远快于传统培养法（3-5天）

储存条件  -20℃ ±5℃ 避光保存  有效期通常为12个月

�� 样本类型

食品样本： 鸡肉、生菜、牛奶、牛肉等（需前增菌处理）。

临床样本： 患者粪便、肛拭子。

环境样本： 水源、养殖场环境拭子。

�� 操作流程简述

样本前处理与增菌：

食品/环境样本： 通常需在Bolton肉汤中进行微需氧前增菌（36℃±1℃培养4h，再42℃±1℃培养24-48h）。

临床样本： 可直接煮沸裂解或提取DNA。

核酸提取： 使用细菌基因组DNA提取试剂盒提取总DNA。

配置反应体系： 将提取的DNA、PCR反应液（含引物、探针、酶）按比例混合。

上机检测：

荧光PCR： 设置FAM通道，运行程序（通常95℃预变性，然后40个循环）。

恒温法： 65℃恒温反应，观察荧光或颜色变化。

结果分析： 根据扩增曲线的Ct值（通常阈值设为35-40）判读阴阳性。

⚠️ 注意事项

临床与应用意义： 空肠弯曲菌是引起人类急性肠炎的主要病原菌之一，也是“活的不可培养（VBNC）”状态研究的热点。核酸检测能有效检出处于VBNC状态但仍具感染性的菌体，弥补了传统培养法的不足。

生物安全： 操作应在生物安全二级（BSL-2）实验室进行。

防污染： PCR检测极其灵敏，必须严格分区操作（试剂准备区、样本处理区、PCR扩增区），防止扩增产物气溶胶污染导致假阳性。

结果解读： 阳性结果提示存在空肠弯曲菌核酸，但需结合培养结果和临床症状综合判断。对于食品检测，若初筛阳性，建议按标准进行分离培养确认。

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注意事项：

1‌、严防污染‌

‌分区操作‌：必须在独立的生物安全柜内进行样本处理、试剂配制和加样，避免气溶胶交叉污染。

‌专用耗材‌：使用无核酸酶的枪头、EP管等，建议使用带滤芯枪头。

‌规范操作‌：加样后立即盖紧管盖，避免试剂外溅。

‌2、保证质量‌

‌样本处理‌：样本采集后应立即冷藏（2-8℃），长期保存需置于-70℃以下，避免反复冻融。

‌试剂保存‌：严格按照说明书要求的温度（通常是-20℃或2-8℃）保存试剂，避免反复冻融。

‌对照设置‌：每次实验必须设置阳性对照、阴性对照和空白对照，监控实验有效性。

3‌、注意安全‌

‌生物安全‌：阳性样本需按生物安全三级标准处理，实验人员需佩戴个人防护装备（PPE）。

‌废弃物处理‌：所有废弃物（包括耗材、样本）需经121℃高压灭菌30分钟后方可丢弃