单核细胞增生李斯特菌 新品

 产品介绍：

单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes, LM）核酸检测试剂盒是一种用于体外定性检测样本中单核细胞增生李斯特菌核酸的分子诊断工具。该菌是重要的食源性致病菌，可导致孕妇流产、新生儿败血症及成人脑膜炎，因此该试剂盒在食品安全监测和临床感染诊断中具有重要意义。

检测原理

目前市面上的试剂盒主要采用以下两种技术路线：

实时荧光PCR法（主流）：

原理： 采用TaqMan探针技术，针对单增李斯特菌的特异性毒力基因设计引物和探针。

靶基因： 最常用的是 hlyA 基因（编码溶血素，具有高度保守性和特异性）；部分试剂盒也会检测 iap（侵袭蛋白基因）或 prfA 基因。

内参系统： 高级试剂盒通常包含内参（如细菌16S rRNA基因，标记HEX/VIC通道），用于监控采样质量、核酸提取效率及扩增过程是否正常，防止假阴性。

恒温荧光法（LAMP）：

原理： 在恒温条件下（如60-65℃）对目标基因进行扩增，无需热循环仪，反应速度快（约60分钟），适合现场快速筛查。

�� 典型性能参数

参数指标  典型数值/范围  说明

检测目标  hlyA 基因 (毒力基因)  确保检测的是致病性菌株

检测方法  荧光PCR法 / 恒温荧光法  探针法为主流

检测限  1×10³ CFU/mL 或 100-500 拷贝/mL  灵敏度高于传统培养法

特异性  ≥99%  不与其他李斯特菌（如英诺克李斯特菌）或肠道菌交叉反应

检测时间  1.5 ～ 2 小时 (荧光PCR)

～ 60 分钟 (LAMP)  远快于传统培养法（24-48小时）

储存条件  -20℃ ±5℃ 避光保存 (液体)

常温 (部分冻干粉)  视具体产品形态而定

�� 样本类型

食品样本（主要）： 乳制品、即食肉类、冷冻虾仁、蔬菜、水果等。

临床样本： 血液、脑脊液、羊水（用于诊断败血症、脑膜炎）。

环境样本： 阴道拭子、直肠拭子（用于孕妇携带筛查）。

�� 操作流程简述

样本前处理与增菌（食品）： 食品样本通常需要经过前增菌（如LB1肉汤，30℃培养24h）以提高检出率。

核酸提取： 使用细菌基因组DNA提取试剂盒（磁珠法或离心柱法）提取样本DNA。

配置反应体系： 将提取的DNA、PCR反应液（含引物、探针、酶）按比例混合。

上机检测：

荧光PCR： 设置FAM通道（检测hlyA），HEX/VIC通道（检测内参），运行程序（通常40个循环）。

恒温扩增： 65℃恒温反应，肉眼观察颜色变化或仪器读取荧光。

结果分析： 根据扩增曲线的Ct值（通常阈值设为35-40）判读阴阳性，同时需确保内参正常扩增。

⚠️ 注意事项

临床与应用意义： 单增李斯特菌对孕妇、新生儿和免疫低下人群危害极大。在食品工业中，该试剂盒用于成品出厂检验和环境监控；在临床中，用于早期快速诊断，为治疗争取时间。

生物安全： 操作应在生物安全二级（BSL-2）实验室进行。

结果解读： 阳性结果提示存在单增李斯特菌核酸，但需结合培养结果判断是否为活菌感染。对于食品检测，若初筛阳性，建议按标准进行分离培养确认。

公司正在出售的产品：

注意事项：

1‌、严防污染‌

‌分区操作‌：必须在独立的生物安全柜内进行样本处理、试剂配制和加样，避免气溶胶交叉污染。

‌专用耗材‌：使用无核酸酶的枪头、EP管等，建议使用带滤芯枪头。

‌规范操作‌：加样后立即盖紧管盖，避免试剂外溅。

‌2、保证质量‌

‌样本处理‌：样本采集后应立即冷藏（2-8℃），长期保存需置于-70℃以下，避免反复冻融。

‌试剂保存‌：严格按照说明书要求的温度（通常是-20℃或2-8℃）保存试剂，避免反复冻融。

‌对照设置‌：每次实验必须设置阳性对照、阴性对照和空白对照，监控实验有效性。

3‌、注意安全‌

‌生物安全‌：阳性样本需按生物安全三级标准处理，实验人员需佩戴个人防护装备（PPE）。

‌废弃物处理‌：所有废弃物（包括耗材、样本）需经121℃高压灭菌30分钟后方可丢弃