铜绿假单胞菌核酸检测试剂盒 新品

产品介绍：

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa, PA）核酸检测试剂盒是一种用于体外定性检测铜绿假单胞菌核酸的分子诊断工具。该菌又称绿脓杆菌，是一种常见的条件致病菌，也是医院内感染（如呼吸机相关性肺炎、血流感染等）的主要病原体之一。

�� 试剂盒核心原理

目前市面上的试剂盒主要基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术或恒温荧光法。

实时荧光PCR法（主流）：

采用TaqMan荧光探针法。针对铜绿假单胞菌的特异性基因（如16S rRNA基因、 gyrB 基因或oprL基因等保守序列）设计引物和探针。

反应体系中通常含有UDG酶/dUTP防污染系统，可在室温下降解可能存在的扩增产物污染，防止假阳性。

在PCR扩增过程中，随着目标序列的指数级扩增，荧光信号同步释放，仪器实时监测并根据Ct值判定结果。

恒温荧光法（新兴）：

基于LAMP（环介导等温扩增）或类似的恒温扩增技术。

特点是无需热循环，在恒温条件下（如60-65℃）即可完成扩增，反应时间更短（通常30分钟左右），适合快速筛查。

�� 典型产品参数

参数项  典型指标/说明

通用名称  铜绿假单胞菌核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法/恒温荧光法）

检测靶标  铜绿假单胞菌特异性保守基因序列

检测方法  荧光PCR法 / 恒温荧光法

样本类型  痰液、咽拭子、支气管肺泡灌洗液、水样（饮用水、环境水）、化妆品、食品等

灵敏度  荧光法：最低检测限通常 500 copies/mL 或 10³ CFU/mL

特异性  仅特异性扩增铜绿假单胞菌，与金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌等无交叉反应

储存条件  -20℃ 避光保存（有效期12个月）；部分恒温法试剂可在-18℃～25℃保存

组成成分

PCR反应液/预混液：含dNTPs、Mg²⁺、缓冲液、特异性引物和探针（或LAMP引物）。

酶混合物：含热启动Taq DNA聚合酶（荧光法）或Bst DNA聚合酶（恒温法），部分含UDG酶。

阳性对照：含有目的基因片段的质粒或灭活菌液（严禁用于临床诊断）。

阴性对照：无核酸酶水或生理盐水。

裂解液/提取液：用于样本的细菌裂解和DNA粗提（部分试剂盒附赠，如试剂盒说明书提到的DNA抽提液）。

�� 结果判读标准（以荧光法为例）

阳性（+）：

FAM通道出现典型的S型扩增曲线。

Ct值 ≤ 35-38（视具体说明书而定）。

结论：样本中检出铜绿假单胞菌核酸。

阴性（-）：

无扩增曲线，或Ct值 > 38-40。

结论：样本中未检出铜绿假单胞菌核酸。

无效：

阳性对照未扩增，或阴性对照出现扩增，提示实验失败或存在污染，需重做。

⚠️ 注意事项与局限性

临床意义：铜绿假单胞菌是医院内感染的重要病原菌，且容易产生多重耐药（MDR）。检测阳性提示存在感染可能，但需结合临床症状（如发热、咳黄绿色痰、肺部影像学改变）及细菌培养结果综合判断。

定植与感染：该菌可在人体皮肤、呼吸道等部位定植。在非无菌部位（如痰液）检出阳性，需鉴别是定植菌还是致病菌。

生物安全：处理痰液等感染性样本时，应在BSL-2实验室中进行，并做好个人防护。

应用广泛：除了临床诊断，该试剂盒也广泛用于饮用水安全、化妆品生产及食品工业中的微生物质量控制。

公司正在出售的产品：

操作步骤：

整个流程遵循“‌样本处理 → 试剂配制 → 加样 → 上机检测 → 结果分析‌”的逻辑，核心是‌防污染‌和‌精准操作‌。

‌1. 样本处理 (核酸提取)‌

‌样本‌：鼻咽拭子、咽拭子或痰液样本。

‌裂解‌：将拭子浸入裂解液，充分混匀后室温静置10分钟。

‌提取‌：采用‌磁珠法或离心柱法‌提取总RNA，严格按照试剂盒说明书操作。

‌保存‌：洗脱后的RNA应立即使用或分装保存于‌-80℃‌。

‌2. 试剂配制与加样‌

‌反应体系准备‌：在‌试剂准备区‌配制Master Mix。根据待检测样本数计算总体积，通常按‌样本数 + 1管阴性对照 + 1管阳性对照‌的原则来配制。

‌推荐体系‌：例如，使用‌20μL‌体系的试剂盒，可包含‌qPCR预混液16μL‌、‌引物探针混合液4μL‌（具体体积请以实际说明书为准）。

‌分装‌：将配好的反应体系分装至PCR反应管中（如‌20μL/管‌）。

‌加样‌：在‌样本处理区‌，分别向反应管中加入‌5μL‌的模板RNA（样本、阳性质控、阴性质控）。‌盖紧管盖，短暂离心‌，避免污染和气泡。

‌3. 上机检测‌
‌运行程序‌：将反应管放入荧光定量PCR仪，运行预设程序。典型程序包括：

‌逆转录‌：50℃，15分钟（将RNA逆转录为cDNA）。

‌预变性‌：95℃，10分钟（激活Hot-Start Taq酶）。

‌扩增循环‌：通常为40个循环，每个循环包括‌变性（95℃，15秒）‌ 和 ‌退火/延伸（60℃，45秒）‌，仪器在退火/延伸步骤同时采集荧光信号。

‌信号监测‌：仪器实时监测荧光信号变化，生成扩增曲线。

‌4. 结果分析与判定‌

‌Ct值‌：仪器根据荧光曲线自动计算阈值循环数（Ct值）。

‌结果判定‌：

‌阳性‌：样本Ct值 ‌≤ 37‌（具体阈值请以试剂盒说明书为准），且扩增曲线呈典型"S"型。

‌阴性‌：样本无Ct值或Ct值 ‌> 40‌。

‌无效‌：阳性对照无Ct值或Ct值 ‌> 35‌，或阴性对照有Ct值，需‌重新检测‌。